43043-74-9 / 去氧紫草素的含量

背景及概述^[1]

紫草藥材中的萘醌類是主要的有效成分，含量約占3%～6. 5%。文獻報道在新疆紫草中得到的萘醌類化合物，包括去氧紫草素、紫草素、β-羥基戊酰紫草素、β-二甲基丙烯酰紫草素、β-羥基異戊酰阿卡寧、乙酰紫草，其中，乙酰紫草醌、紫草醌、去氧紫草素等萘醌類色素為紫草藥材的主要有效成分。

含量測定^[1]

1 儀器與試劑

1. 1 儀器

Waterse2695 高效液相色譜儀，Waters2998 二極管陣列檢測器； KQ-250DB 型數控超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)；電子天平FR224CN(上海奧豪斯儀器有限公司制造)；電熱恒溫水浴鍋HH. SY11-NY2C(北京市長風儀器儀表公司)；SHBIII 循環水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司) 。

1. 2 材料與試劑

去氧紫草素對照品(上海源葉生物科技有限公司 B21034-10MG)； 山東紫草、 安徽紫草和新疆紫草(藥店購買，經段瑞老師鑒定)；乙腈色譜純(天津永大試劑有限公司)；甲醇色譜純(天津永大試劑有限公司) 。

2 試驗方法與結果

2. 1 溶液配制

2. 1. 1 對照品溶液的制備

精密稱取去氧紫草素的對照品1 mg，置 10 ml 的容量瓶中，用甲醇溶解，

稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為 0. 1 mg/ml 的對照品溶液，置陰涼干燥處，避光環境保存。

2. 1. 2 供試品溶液的制備

將干燥紫草藥材粉碎，過 60 目篩， 精密稱取紫草藥材粉末1. 0 g，置于 50

ml 的錐形瓶中，加入甲醇 25 ml，超聲提取30 min，振搖后靜置冷卻約10 min，濾過，濾渣加20 ml 的甲醇，超聲提取20 min，合并甲醇濾液并定容至50 ml，置40 ℃恒溫水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至25 ml，用0. 45μm的微孔濾膜過濾， 既得供試品溶液。

2. 2 方法學考察和樣品測定

2. 2. 1 色譜條件和系統適應性試驗

色譜柱: Symmetry C18 BDS 柱(250 mm×4. 6 mm，5μm)； 流動相:乙腈∶水( 80∶20)；流速: 1. 0 ml/min； 檢測波長: 265 nm；柱溫: 35 ℃；進樣量: 20 μl； 檢測時間: 30min。在此色譜條件下，去氧紫草素的理論塔板數大于5000，與相鄰色譜峰分離度大于 1. 7，對稱因子為1. 06。

2. 2. 2 專屬性試驗

取空白溶液、對照品溶液、三個產地的供試品溶液適量，按“2. 2. 1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖(圖1)。由圖 1 可見，空白溶液色譜在對照品色譜相應的位置無吸收峰，表明在該試驗條件下其他組分對測定結果無干擾，專屬性較好。

2. 2.3 線性關系的考察

精密量取去氧紫草素對照品溶液(0. 1 mg /ml) 各1. 0 ml、2. 0 ml、3. 0 ml、 4. 0ml、5. 0 ml，分別置于 10 ml 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成10. 0μg /ml、20. 0μg /ml、30. 0 μg/ml、40. 0μg /ml、50. 0 μg /ml 的溶液，分別取各溶液20μl 進樣，在上述色譜條件下進行分析。以對照品濃度(μg /ml) 為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線并進行回歸計算可得線性回歸方程為: Y = 34769X－62579，r = 0. 9994， 表明去氧紫草素在 10. 00～50. 00μɡ/ml范圍內線性關系良好。

2. 2. 4 精密度試驗

取線性關系項下取配好的去氧紫草素對照品溶液，連續進樣 6 次，記錄在 265 nm處去氧紫草素的色譜圖，以峰面積計算，RSD 值為0. 31% ，表明儀器的精密度良好。

2. 2. 5 穩定性試驗

稱取三個產地的紫草粉末，按“2. 1. 2” 項下的方法制備供試品溶液， 按“2. 2. 1”項下的色譜條件進樣，分別在 0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10h 不同時間段內重復進樣三次，每次進樣 20μl，記錄去氧紫草素的峰面積，計算其含量，RSD 分別為安徽 0. 10% ，新疆 0. 07%，山東 0. 06% ，表明三個產地去氧紫草素在 10 h 內較穩定。

2. 2. 6 重復性試驗

分別取山東、新疆、安徽產地的紫草粉末，按“2. 1. 2” 項下的方法分別制備供試品溶液并處理成6份，依次進樣每次20μl，平行測定 6次，計算去氧紫草素的百分含量分別為山東71. 40% ，新疆 67. 83%，安徽134. 37%，RSD 值分別為0. 04%，0. 10%，0. 58% 。表明方法重復性較好。

2. 2. 7 回收率試驗

準確量取已知含量的安徽供試品溶液共 9 份，每份 1 ml，分別精密加入去氧紫草素對照品適量( 約相當于安徽紫草中去氧紫草素含量的 80%，100%，120% )，置于 5 ml 的容量瓶。實驗分為三組，每組分為 3 份。按“2. 2. 1” 項下色譜條件進樣 20μl，測定峰面積，計算去氧紫草素的含量。測得低、中、高三個不同濃度的平均加樣回收率分別為 100. 17%， 112. 82%， 125. 28%， 9 個加樣回收率數據的RSD 值 0. 10%，在誤差允許的范圍內。

2. 2. 8 樣品的含量測定

分別稱取山東、新疆和安徽紫草粉末，按“2. 1. 2”項下方法制備供試品溶液，各處理成3 份，按“2. 2. 1”項下色譜條件進樣測定，山東、新疆、安徽紫草中去氧紫草素的百分含量分別為 71. 42% 、67. 77% 、135. 32%，RSD 分別為0. 02%、0. 04%、0. 04% 。其結果見表 1，實驗結果表明，不同產地的紫草中去氧紫草素的含量存在差別。

主要參考資料

[1]朱永樂,董娜,曲曉蘭,齊永秀.HPLC法測定不同產地紫草中去氧紫草素的含量[J].泰山醫學院學報,2017,38(11):1229-1231.