5985-28-4 / 辛弗林鹽酸鹽

【背景及概述】^[1][2][3]

生物堿（alkaloids）一般是指存在于植物中的堿性含氮化合物，大多數具有含氮雜環，有旋光性和明顯的生理效應。大量研究發現，在蕓香科柑桔屬植物中存在生物堿類化合物，主要有羥苯乙醇胺（octopamine）、辛弗林（synephrine）、酪胺（tyramine）、N-甲基酪胺（N-methyltyramine）、大麥芽堿（hordenine）等苯乙胺生物堿（phenethylamine alkaloids）。

辛弗林別名1-(4-羥基苯基)-2-(甲基氨基)乙醇；辛佛寧；辛福林堿；對羥福林；交感醇；昔奈福林；辛內弗林；1-對羥苯基-2-甲氨基乙醇；脫氧腎上腺素；對羥-Α-甲胺甲芐醇；辛弗寧；枳實提取物，辛弗林屬于生物堿中的麻黃堿類，分子結構中同時含有酚羥基和氨基，因此辛弗林具有兩性性質，與酸堿均能結合成鹽。游離的辛弗林易溶于有機溶劑，難溶于水；其酸式鹽和堿式鹽則易溶于水，難溶于有機溶劑。辛弗林已收載于北歐三國藥典和德國藥典。目前認為，其為腎上腺素α-受體興奮劑。辛弗林有收縮血管、產生升高血壓的作用。辛弗林有較強的擴張氣管和支氣管的作用。麻醉貓靜脈注射可完全對抗組織胺所引起的支氣管收縮，對豚鼠離體氣管亦有同樣作用。辛弗林臨床用于治療支氣管哮喘及手術和麻醉時低血壓、虛脫及休克、體位性低血壓等。辛弗林是21世紀天然興奮劑，無任何副作用和陽性反應，廣泛用于醫藥、食品、飲料等保健行業，隨著化學合成藥物的禁用，辛弗林的需求量和價值將會倍增。L-辛弗林存在于酸橙和柑橘的干燥幼果枳實、青皮等植物中，含量僅為0.28-2.53％。目前，市售的L-辛弗林產品純度低，雜質多，不能應用于醫藥等高附加值領域。因此，研發出制備高純度L-辛弗林成為本領域的關鍵。

【藥理作用及應用】^[3][4]

辛弗林鹽酸鹽可用作升壓藥，用于休克，用于心衰，治療支氣管哮喘及手術和麻醉時底血壓，虛脫及休克，體、位低血壓等；α-腎上腺素受體激動劑，血管收縮劑等。

1. 對心血管的作用

枳實、枳殼煎劑、枳實提取物、枳實注射液及其有效成分的辛弗林鹽酸鹽靜脈注射，能顯著增強麻醉犬的多種心肌收縮性和泵血功能的指標，具有強心、收縮血管、提高總外周阻力，而使左心室壓力和動脈血壓上升的作用。現代研究又證實枳實可濃度依賴性地提高兔主動脈張力，使主動脈平滑肌收縮。

2.對減肥的作用

辛弗林鹽酸鹽作為減肥促進劑，其作用機理是刺激β-3腎上腺素受體而發生脂質分解以及隨后產生的生熱作用。大多數含有辛弗林鹽酸鹽的膳食補充劑中還含有其他不同成分，主要是咖啡因、水楊酸和麻黃堿。上述多種化學成分聯合作用能夠提高辛弗林鹽酸鹽的減肥功效。以大鼠為研究對象，重復口服市售辛弗林鹽酸鹽含量標準化的酸橙水醇提取物，評價其食物攝取和心血管功能，發現酸橙提取物能夠降低食物攝取量和體重增加，實驗組動物的心電圖出現異常。

3.對血壓的影響

藥理學中辛弗林鹽酸鹽被用作去充血劑，通過口服形式治療低血壓。以10個健康成年人為對象，研究含有酸橙提取物的膳食補充劑對血流動力學的影響，證明一些膳食補充劑能夠提高健康、血壓正常的受試者的血壓和心血管興奮作用，可能是在多組分的配方與咖啡因和其他興奮劑協同所導致。動物實驗研究已表明，辛弗林鹽酸鹽和酸橙提取物提高血壓。連續六周服用酸橙提取物（6%辛弗林鹽酸鹽）和8盎司的果汁（包含大約13～14mg辛弗林鹽酸鹽），發現受試者的血壓未產生任何顯著影響，評價辛弗林鹽酸鹽對血壓的影響可能需要更長的研究周期。也有文獻報道辛弗具有顯著的升壓效應，加強心肌收縮力，減慢心率和增加心輸出量，增加冠脈流量，增加腎血流量等。

4.對糖尿病的作用

枳實提取物對實驗性糖尿病小鼠肝臟抗氧化防御功能的影響，用高、中、低劑量的枳實提取物對糖尿病小鼠進行灌胃治療，觀察肝臟的抗氧化能力及肝臟的組織形態學變化。枳實提取物治療組與糖尿病模型組相比較，血糖水平顯著降低（p＜0.05），谷胱甘肽含量顯著增加（p＜0.05），谷胱甘肽過氧化物酶活性，丙二醛及氮氧化物含量顯著降低（p＜0.01），超過氧化物歧化酶活性增加。光鏡下，枳實提取物治療組肝臟組織細胞損傷較糖尿病組降低，說明枳實提取物具有增強肝臟的抗氧化能力，降低肝細胞損傷的作用。

1.對支氣管的作用

通過麻醉貓，靜脈注射辛弗林鹽酸鹽可完全對抗組胺所引起的支氣管收縮；其對豚鼠離體器官亦有同樣作用。

2.對抑郁癥的作用

有學者通過建立小鼠尾懸掛實驗和小鼠強迫游泳實驗抑郁模型，對p-辛弗林鹽酸鹽的抗抑郁作用進行研究，以不動的失望時間為指標，灌胃劑量1～10mg/kg（0.5m L/25g體重），顯著降低其不動時間。精神振奮藥物可以降低不動時間，但是刺激自主活動，p-辛弗林鹽酸鹽灌胃劑量0.3～10mg/kg，發現小鼠的開野實驗中自主活動未發生顯著變化排除了是p-辛弗林鹽酸鹽的精神興奮作用。p-辛弗林鹽酸鹽在行為絕望動物抑郁模型上有明顯抗抑郁作用，可以對抗其失望行為，使得絕望行為（不動時間）降低，可能與刺激α-1腎上腺素受體有關。可能對于低血壓患者的抗抑郁作用有治療作用。

【副作用】^[3]

由于辛弗林鹽酸鹽對腎上腺素刺激作用，所以患有嚴重高血壓、快速性心律失常、窄角青光眼和單胺氧化酶抑制劑接受者的病人應避免給食用枳實提取物。辛弗林鹽酸鹽可以造成周期性偏頭痛和原發性頭痛。文獻研究表明，含有辛弗林鹽酸鹽的膳食補充劑中同時含有其他如甲基黃嘌呤、麻黃堿、牛磺酸。甲基黃嘌呤毒性表現在引起顫抖，心跳過速，癲癇發作。對中樞神經有刺激作用的麻黃堿會造成的副作用有心力衰竭，中風，伴隨此類物質的存在，會增加產品的副作用造成健康威脅。但在大多數含有酸橙提取物膳食補充劑中，p-辛弗林鹽酸鹽和其他草藥成分包括咖啡因等共同存在。因此，難以評估其單獨存在的副作用。以白化病小鼠為研究對象，通過自發運動實驗，體溫效應等評價酸橙提取物和p-辛弗林鹽酸鹽的急性毒性。飼喂劑量1000～5000mg/kg酸橙提取物（2.5% p-辛弗林鹽酸鹽），15min后，自發運動活性明顯降低，p-辛弗林鹽酸鹽（150～2000mg/kg）15min，出現毛發直立，喘氣，流涎等明顯癥狀，自發運動活性降低，上述癥狀持續3～4h，均是可逆的。離體器官的尸檢沒有出現異常。觀測到的毒性作用和相應的腎上腺素刺激有關， p-辛弗林鹽酸鹽不僅作用于β3-腎上腺素受體，而且作用于β2-腎上腺素受體和α1-腎上腺素受體。

【制備】^[1][2]

辛弗林鹽酸鹽既可化學合成又可從植物中提取，化學合成的路線有氨基乙氰法和直接酰化法，獲得的產物為DL-外消旋體，由于D-對映體可能存在副作用且難以分離，致使化學合成L-辛 弗林受到嚴重制約。因而，從植物中提取分離成為制備L-辛弗林的唯一方法。

方法1：一種從柑橘皮中提取辛弗林的方法，該方法包括步驟：

1）制備辛弗林粗提物：取柑橘皮渣，用乙醇水溶液提取得到辛弗林粗提物；

2）初步純化：將辛弗林粗提物用乙酸乙酯萃取后，使用HP20樹脂進行柱層析；

3）精制：將步驟2）得到的初步純化的辛弗林用XAD18樹脂進行柱層析，并通過HPLC 檢測，將辛弗林純度大于95％的洗脫液混合，冷凍干燥得白色粉末狀物質即為辛 弗林。

方法2：一種制備高純度L-辛弗林的方法，以市售枳實為原料，經溶解及抽濾、超濾除糖和蛋白質、大孔吸附樹脂脫色、乙醇除寡糖、反滲透膜濃縮、冷凍干 燥，制得L-辛弗林粉末。其具體的方法步驟如下：

1）制備L-辛弗林原料液：以市售枳實為原料，用粉碎機粉碎后過20目的篩網，未過篩網的顆粒進行下一批次的粉、碎，過篩網的粉末進行提取L-辛弗林操作。按枳實粉末質量：0.05～0.1mol/L鹽酸溶液體積之比為1kg∶8～10L的比例，將枳實粉末分散在0.05～0.1mol/L的鹽酸水溶液中，先浸泡1～2h后， 再攪拌3～5h，進行第一次提取，接著將提取物在6000～8000r/min的條件下進行第一次離心分離10～20min，分別收集第一次離心分離上清液和沉淀；對收集的第一次離心分離沉淀，按枳實粉末質量：0.05～0.1mol/L鹽酸溶液體積之比為1kg∶4～6L的比例，先將第一次離心沉淀分散于0.05～0.1mol/L鹽酸水溶液中，再攪拌3～5h，進行第二次提取，接著將第二次提取物在6000 ～8000r/min的條件下進行第二次離心分離10～20min，分別收集第二次離心分離的上清液和沉 淀。對收集的第二次離心分離沉淀，用于進一步提取橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷；對收集的 第二次離心分離上清液，與第一次離心分離上清液合并，即為L-辛弗林原料液，用于下步制備L-辛弗林脫糖液。

2）制備L-辛弗林脫糖液：在第1）步完成之后，先將第1）步收集的L-辛弗林原料液泵入超濾器中，用截留分子量為3000～10000Da的超濾膜，在0.05～0.2MPa的壓力下進行超濾分離。分別收集濾過液和 截留液，對收集的截留液，主要含有大分子糖類和蛋白質，用作發酵食用菌的添加劑；對于收集的濾過液，即為L-辛弗林脫糖液，用于下步制備L-辛弗林脫色液。

3）制備L-辛弗林脫色液：取已活化的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂濕法裝柱，按照大孔吸附樹脂體積：第2）步制備出的L-辛弗林脫糖液體積的比為1L∶5～15L的比例，將第2）步制備出的L-辛弗林脫糖液泵入裝有D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂的層析柱中，控制L-辛弗林脫糖液泵入流速為D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂 體積的1～5倍/小時(BV/h)，進行脫色處理。處理完成后分別收集吸附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱和流出的柱后液；對收集的吸附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，先用3～5倍樹脂體積的蒸餾水沖洗。分別收集水洗液和洗滌后的吸附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱；對收集的水洗液，與流出的柱后液合并，即為L-辛弗林脫色液，用于下步制備L-辛弗林脫寡糖液；對收集的水洗后的吸附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，用pH為 9.5～10.5、乙醇濃度為30％～60％的水溶液洗脫，洗脫液流速為1～5倍樹脂體積/小時(BV/h)。分別收集洗脫液和脫附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，對收集的洗脫液，含大量黃色素，用于減壓濃縮回收乙醇并制備黃色素；對收集的脫附色素的 D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，用3～5倍樹脂體積的蒸餾水沖洗，分別收集水洗液和水洗后的脫附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，對收集的水洗液，泵入水處理池進行生化處理，達標后排放；對收集的水洗后脫附色素的的 D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，可用于下批次吸附色素處理。

4）制備L-辛弗林脫寡糖液：在第3）步完成之后，按第3）步制備出的L-辛弗林脫色液體積：95％乙醇體積比為 1L∶1～3L的比例，向脫色液中加入95％乙醇，攪拌10～30min后靜置2～4h，過濾并收集濾液和濾渣。對收集的濾渣，用于制備高純度寡糖；對收集的濾液，在40～55℃、真空度為-0.06MPa ～-0.09MPa的條件下，進行真空減壓濃縮。分別收集真空減壓濃縮液和冷凝液，對收集的冷 液，主要含乙醇，調配成乙醇濃度為30％～60％的洗脫水溶液，用于下批次洗脫黃色素；對收集的濃縮液，即為L-辛弗林脫寡糖液，用于下步制備L-辛弗林反滲透濃縮液。

5）制備L-辛弗林反滲透濃縮液：第4）步完成后，先將第4）步收集的L-辛弗林脫寡糖液泵入反滲透器中，在0.2～0.6MPa 的壓力下進行反滲透濃縮。分別收集反滲透濾過液及截留液，對收集的濾過液，調節酸度后用于從下一批次的枳實粉中提取L-辛弗林；對收集的截留液，即L-辛弗林反滲透濃縮液，用于下步制備L-辛弗林凍干粉。

6）制備L-辛弗林凍干粉：第5）步完成之后，先將第5）步制備的L-辛弗林反滲透濃縮液在-10～-30℃下，預凍3～5小時，再置于冷凍干燥機中，在真空度為20～60Pa、溫度為-40～-60℃的條件下，冷凍干燥24～30小時，就制備出L-辛弗林凍干粉。

7）樹脂的再生：將用了10～15次后的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂，用蒸餾水 沖洗至流出液清澈不渾濁；再依次用2～3倍樹脂體積的95％乙醇、蒸餾水、5％HCl、蒸餾水、5％NaOH浸泡攪拌2h，最后用蒸餾水洗至中性，備用。

【主要參考資料】

[1] 王林婧.一種提取鹽酸辛弗林的方法. CN201410647518.4，申請日2014-11-14

[2] 顏李秀；周小華；莫卓群；馮琳；萬玉萍.一種制備高純度L-鹽酸辛弗林的方法. CN201310305483.1，申請日2013-07-13

[3] 張文娟, 陶緣, 王亞軍, 等. 柑橘屬中生物堿鹽酸辛弗林生理活性的研究進展[D]. , 2013.

[4] https：//db.yaozh.com/hhw/content?cas=94-07-5