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27740-01-8 / 野黃芩苷的提取及含量測定

背景及概述[1][2]

紅盞花素又叫野黃芩苷,其植物來源有唇形科植物高黃芩的葉,黃芩的莖、葉以及半枝蓮全草等。臨床研究結果表明,野黃芩苷具有降低腦血管阻力,改善腦血循環、增加腦血流量及抗血小板凝集的作用,臨床用于腦血管病后癱瘓的治療。

野黃芩苷的提取及含量測定

純化[1]

一種新穎的純化野黃芩苷的純化方法,通過以下步驟實現:首先在一定溫度下,將野黃芩苷粗品放入到一定量的溶劑中,用堿溶液調pH,直至野黃芩苷全部溶解于溶液中;然后通過蒸發或降溫的方法析出結晶,過濾,洗滌,干燥,得到精制的野黃芩苷鹽的中間體;重新選 擇溶劑,將結晶狀中間體產品溶于其中,加入適當的酸性溶液,調節溶液的pH,使野黃芩苷鹽轉變為野黃芩苷形式并從溶液中析出;再經過濾、洗滌、干燥,得到野黃芩苷結晶。

具體步驟以下:

(1)在40~60℃下,將野黃芩苷粗品按重量體積比1:5~1:20g/mL加入溶劑溶液中,用質量濃度為5~20%的堿溶液調pH至8.0~9.0,使野黃芩苷全部溶解,然后在4~10℃下放置結晶,經36~48小時后,過濾,用水洗滌,干燥,得中間體野黃芩苷鈉鹽或鉀鹽的結晶;

(2)在10~35℃下,將野黃芩苷鈉鹽或鉀鹽的結晶,按重量體積比1:10~1:20g/mL加入到溶劑溶液中溶解,用質量濃度為5~20%的堿溶液調pH至8.0~9.0使鹽全部溶解,再用質量濃度為5~10%的酸溶液調pH至1.5~2.5,放置4~6小時, 過濾,用水洗滌沉淀,干燥,得到純化的野黃芩苷結晶。

提取 [2]

從黃芩莖葉中提取分離高純度野黃芩苷的方法,包括以下步驟:

(1)將50kg黃芩莖葉(野黃芩苷的含量大約為0.5kg)粉碎至10目至200目,得到黃 芩莖葉粗粉末;

(2)按重量比1:8向黃芩莖葉粉末中加入濃度為50%的乙醇,加熱至沸騰,提取2 次,每次1.5h,合并得到第一提取液;

(3)將上述第一提取液用濾布過濾后得到第一濾液,在溫度為60℃、壓力為 0.08MPa的條件下減壓濃縮,去除第一濾液中的乙醇,即得到不含乙醇的野黃芩苷濃縮液;

(4)將野黃芩苷濃縮液,用10%的碳酸鈉溶液調節pH值至7,過濾,得第二濾液,棄去沉淀物;

(5)向第二濾液中加入10%的鹽酸溶液,調節pH值至1,靜置36h,析出棕色沉淀物,傾出上層溶液;

(6)將傾出的上層溶液繼續靜置18h,析出土黃色沉淀物;

(7)分別取棕色沉淀和土黃色沉淀物合并后過濾,濾餅先用蒸餾水,再用乙酸乙酯洗至中性,得到混合沉淀物,然后在50℃的低溫下干燥,即得到野黃芩苷粗品;

(8)向野黃芩苷粗品中加入20倍體積的濃度為95%的乙醇及野黃芩苷粗品重量的 1%的活性炭,加熱至沸騰,提取1h,得到第二提取液,將第二提取液過濾,得到第三濾液,將 第三濾液濃縮至原體積的80%,靜置使析出晶體,過濾,將所得晶體用濃度為45%的乙醇洗 滌5次,得野黃芩苷晶體;

(9)向上述野黃芩苷晶體中加入10倍體積的濃度為30%至50%的丙酮水溶液,搖勻,加入10%的鹽酸調節pH值為2,靜置后過濾,將沉淀物水洗至中性,干燥得到0.453kg高純度的野黃芩苷。

含量測定[3]

燈盞花素片是由菊科植物短葶飛蓬(燈盞細辛)Erigeron breviscapus(Vant.)Hand. -Mazz.提取物制成,主要成分為野黃芩苷(4′-羥基黃芩苷,又稱燈盞花乙素)和少 量的燈盞花甲素,具有散寒解表、活血化瘀、通絡止痛的功效,臨床上用于中風后遺癥、冠心病、心絞痛等的治療。

一種測定燈盞花素片中野黃芩苷含量的方法,包括以下步驟:

(1)燈盞花素片供試品溶液的制備

取燈盞花素片,粉碎,取粉末20.0mg,精密稱定,置于2mL的量瓶中,加入 氘代二甲基亞砜溶解并定容至刻度,精密移取1mL上述溶液置于2mL的量瓶中,加入1mL濃度為0.1mg/mL的3-三甲基硅基丙酸鈉-d4的重水定容至刻度,混勻,14000rpm離心10分鐘,取上清液,作為燈盞花素片供試品溶液;

(2)燈盞花素片供試品溶液的1H-NMR檢測

取0.6mL步驟(1)所得的燈盞花素片供試品溶液,轉移至5mm核磁管中密封,將核磁管置于核磁共振儀中,按以下條件進行1H-NMR檢測:抑水峰序列zgcppr,觀測頻率600.23MHz,測定溫度297.7K,譜寬12335.5Hz,90°脈沖寬度13μs,數據采樣點65536,掃描次數16次,延遲時間15s,接受增益203,得到燈盞花素片供試品溶液的1H-NMR譜圖;

(3)燈盞花素片供試品溶液中野黃芩苷的1H-NMR結構解析及定量峰的選擇

根據燈盞花素片供試品溶液的1H-NMR譜圖,對其化學位移和耦合常數進行歸屬,解析化合物為野黃芩苷,具體為δ7.93:2H,d,J=9Hz,H-2′,6′;δ6.98:3H,m,H-8, 3',5';δ6.82:1H,s,H-3;δ5.22:1H,d,J=7.2Hz,H-1″;δ4.03:1H,d,J=9.6Hz,H-5″; 選取其中無干擾的質子信號峰1H或2H或3H作為野黃芩苷的定量峰;或選取其中無干擾的質子信號峰1H和2H,或1H和3H,或2H和3H作為野黃芩苷的定量峰;或同時選取其中無干擾的質子信號峰1H、2H和3H作為野黃芩苷的定量峰,其中質子信號峰1H、2H、3H的化學位移δ分別為6.82、7.93、6.98ppm;

(4)燈盞花素片中野黃芩苷的定量分析

按步驟(1)制備燈盞花素片供試品溶液,按步驟(2)進行1H-NMR檢測,按步驟(3)所選定的定量峰采用內標法計算燈盞花素片中野黃芩苷的含量。

本測定燈盞花素片中野黃芩苷含量的方法,不僅具有簡單快速、專屬性強、重現性好等特點,而且無需被測化合物的對照品即可實現準確定量,可以彌補現有標準和其他定量方法的不足,可應用于燈盞花素片的質量控制。

主要參考資料

[1] CN201110143319.6 一種野黃芩苷的純化方法

[2] CN201710806480.4 一種從黃芩莖葉中提取分離高純度野黃芩苷的方法及野黃芩苷

[3] CN201410028292.X 一種測定燈盞花素片中野黃芩苷含量的方法

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