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苯酚(Phenol，CHOH)是是生產某些樹脂、殺菌劑、防腐劑以及藥物(如阿司匹林)的重要原料，也可用于消毒外科器械和排泄物的處理，還可以用于皮膚殺菌、止癢和中耳炎等，具有廣泛的應用范圍。
在生物制品的制備過程中，苯酚是一種優良的殺菌劑，其作用機理為苯酚能夠裂解并穿透細胞壁，與菌體蛋白結合，引起蛋白變性，進而實現菌體的滅活。然而，由于苯酚毒性較大，苯酚在生物制品中對生物制品的質量也會產生一定的影響，因此在中間產品加工為成品之前需要對中間產品中的苯酚含量加以測定。
一種高效液相色譜檢測生物制品中苯酚含量的方法，包括以下步驟：
①樣品制備：量取適量生產批號為A20170702的A群腦膜炎多糖溶液，用孔徑為0.45μm的濾膜過濾，得到樣品；
②儀器檢查：按洗脫的初始體積比將流動相A和流動相B接入高效液相色譜儀的C色譜柱中平衡，檢查高效液相色譜儀的各個系統，確保儀器正常，其中，流動相A為1.0‰TFA-乙腈溶液，流動相B為1.0‰TFA-水溶液；
③檢測前準備：設置高效液相色譜儀的色譜條件，其中，壓力警戒為3.5bar、檢測波長為280nm、流速為1.0mL/min、進樣量為40μL、柱溫為24℃；隨后繼續按初始體積比將流動相A和流動相B接入C色譜柱中，直至C色譜柱內的各物質含量達到動態平衡；
其中，對于流速和進樣量的選擇，進行了無數次摸索試驗，其中在流速為0.5-1.0mL/min、進樣量為40-100μL時色譜峰峰形良好。
④苯酚洗脫：將步驟①中得到的樣品加入至步驟③中已平衡的C色譜柱中，按流動相A和流動相B之間的體積比的不同分成七個洗脫階段，依次對樣品中的苯酚進行梯度洗脫，記錄色譜圖，隨后經分析計算得出樣品中苯酚的吸收峰面積為230.43；
其中，上述的七個洗脫階段按體積百分數計，見下表1所示依次進行梯度洗脫：
⑤繪制線性回歸方程：精密量取分別精密量取40μL的濃度依次為0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的苯酚標準溶液作為標準對照液，將各組標準對照液分別按照步驟④中的七個洗脫階段進行梯度洗脫，記錄色譜圖，測得標準對照液的吸收峰面積，最后以標準對照液濃度為橫坐標、以吸收峰面積為縱坐標制作的線性回歸方程，具體為Y＝27.8037x+59.6158，線性相關系數r＝0.99993，呈良好線性關系，當樣品中的苯酚超過此線性范圍時，可適當加大樣品的稀釋倍數。
⑥苯酚含量測定：將步驟④所得的苯酚的吸收峰面積代入步驟⑤中線性回歸方程中，計算得到樣品中苯酚的含量為6.1436μg/mL。
[1] [中國發明] CN201811192272.0 一種高效液相色譜檢測生物制品中苯酚含量的方法