115939-25-8 / 丹參酚酸B的制備和藥理活性研究

背景及概述^[1]

丹參的化學(xué)成分包括兩大類：一是以丹參酮II A為代表的脂溶性菲醌類化合物；二是以 丹參酚酸B為代表的水溶性酚酸類化合物。現(xiàn)代藥理研究已經(jīng)證明丹參酚酸B具有廣泛的藥理活性，比如，可以抗氧化作用，清除 氧自由基、抑制脂質(zhì)體過氧化反應(yīng)，可以提高SOD的活性，抑制氧自由基對心肌的損傷作用， 減輕缺血再灌注損傷；還可以減輕鈣超載，使心肌缺血細(xì)胞內(nèi)的鈣鎂ATP酶活性下降；同時 還有抑制血管損傷促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)NO的合成，清除細(xì)胞內(nèi)活性氧；同時還具有抗炎作用，降低 內(nèi)皮細(xì)胞間黏附因子的表達(dá)。

制備^[2]

水提取(浸漬法)：取丹參粉碎可過三號篩，稱50Kg，按其重量的20倍量加純水，室溫浸泡4小時并適當(dāng)攪拌，分離提取液，殘?jiān)丛⒅亓康?0倍加水，室溫浸泡6小時并適當(dāng)攪拌，分離提取液。合并兩次提取液，用過濾方法去除其中的固體雜質(zhì)。

在上述提取液中加入抗氧劑亞硫酸氫鈉，亞硫酸氫鈉的用量為提取液體積的0.005％。靜置6小時，溶液變混濁并逐漸出現(xiàn)沉淀，過濾去除沉淀，經(jīng)HPLC測定，濾液中丹參酚酸B量為2.632Kg。

將上述濾液加至處理好的AB-8型大孔樹脂柱，先用5個柱體積的酸水(用鹽酸調(diào)pH＝2的純水)洗柱，去除大部分未與大孔樹脂結(jié)合的雜質(zhì)，再用25％的乙醇水溶液洗5個柱體積，然后用40％乙醇洗脫5個柱體積，基本可將丹參酚酸B收集完全。最后用95％乙醇洗脫3個柱體積后用去離子水洗10-20個柱體積，再生柱子。

收集上述用40％乙醇洗脫時的流出液，在70℃、真空度-0.1Mpa的條件下減壓脫醇濃縮至含藥量5％左右，冷凍干燥，制得丹參酚酸B含量為95.45％的樣品2.461Kg，丹參酚酸B回收率為89.25％。

藥理作用研究^[3-4]

湯中杰等人驗(yàn)證了SOX2OT/miRNA（miR）-34a/SOX2信號軸對人大腸癌LOVO細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響以及丹參酚酸B（SalB）通過該信號軸濃度依賴性抑制LOVO細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。方法:雙熒光素酶報(bào)告基因檢測SOX2OT與miR-34a、miR-34a與SOX2的靶向結(jié)合;瞬時轉(zhuǎn)染SOX2OT質(zhì)粒和miR-34a mimic至LOVO細(xì)胞,RT-qPCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率;RT-qPCR、Western blot檢測SOX2OT、miR-34a與SOX2三者表達(dá)的相關(guān)性;劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測SOX2OT/miR-34a/SOX2軸對LOVO細(xì)胞侵襲遷移的影響;MTT法檢測丹參酚酸B對LOVO生長抑制作用;RT-qPCR檢測低、中、高濃度丹參酚酸B處理下SOX2OT的表達(dá);劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測低、中、高劑量丹參酚酸B作用時細(xì)胞侵襲遷移情況。結(jié)果:LOVO細(xì)胞中SOX2OT與miR-34a、miR-34a與SOX2之間存在靶向結(jié)合;SOX2OT抑制miR-34a,上調(diào)SOX2;miR-34a可下調(diào)SOX2OT和SOX2表達(dá);miR-34a逆轉(zhuǎn)SOX2OT對細(xì)胞侵襲和遷移能力的增強(qiáng)作用;在一定濃度范圍內(nèi)丹參酚酸B量效相關(guān)性抑制LOVO細(xì)胞生長;丹參酚酸B濃度依賴性抑制LOVO細(xì)胞SOX2OT表達(dá);丹參酚酸B抑制LOVO細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移,且隨著濃度增加,抑制作用增強(qiáng)。結(jié)論:SOX2OT/miR-34a/SOX2信號軸與LOVO細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān),丹參酚酸B通過抑制該信號軸量效相關(guān)性抑制LOVO細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。

郭飄婷等人驗(yàn)證了丹參酚酸B（Salvianolic acid B,SalB）抑制人大腸癌細(xì)胞HCT-116增殖并促進(jìn)其凋亡,進(jìn)一步通過活性氧簇（Reactive oxygen species,ROS）闡述其可能機(jī)制。方法：體外培養(yǎng)大腸癌細(xì)胞HCF-116,分成HCT-116組、HCT-116+H2O2組、HCT-116+SalB組、HCT-116+SalB+N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）組。分組干預(yù)后,采用MTT法檢測細(xì)胞存活率、平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖、流式細(xì)胞術(shù)檢測ROS含量、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡率。結(jié)果：SalB對HCT-116細(xì)胞具有抑制作用,且在一定濃度范圍內(nèi)呈正相關(guān)（P<0.01）;SalB、H2O2促進(jìn)HCT-116細(xì)胞內(nèi)ROS生成（P<0.01）,ROS清除劑NAC預(yù)處理可清除由SalB產(chǎn)生的ROS（P<0.01）;SalB抑制HCT-116細(xì)胞增殖（P<0.01）并促進(jìn)其凋亡（P<0.01）,該作用可被NAC部分逆轉(zhuǎn)（P<0.05）;SalB引起HCT-116細(xì)胞G0/G1周期阻滯（P<0.01）,NAC預(yù)處理完全逆轉(zhuǎn)SalB導(dǎo)致的周期阻滯（P<0.05）。結(jié)論：SalB可通過增加HCT-116細(xì)胞內(nèi)ROS水平引起細(xì)胞周期阻滯,從而抑制細(xì)胞增殖,并促進(jìn)其凋亡。

參考文獻(xiàn)

[1] [中國發(fā)明] CN201410102854.0 一種化學(xué)合成丹參酚酸B及其類似物的方法

[2] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN200510104412.0 一種制備丹參酚酸B的方法

[3]湯中杰,汪鑫,郭飄婷.丹參酚酸B靶向SOX2OT/miRNA-34a/SOX2軸抑制大腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2021,29(02):97-104.

[4]郭飄婷,閔麗,陳建軍,汪鑫,倪思憶.丹參酚酸B調(diào)控ROS抑制大腸癌細(xì)胞HCT-116增殖并促進(jìn)其凋亡[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,2020,34(06):504-510.