120287-85-6 / 醋酸西曲瑞克的應用

背景及概述^[1][2]

醋酸西曲瑞克(cetrorelixAcetate)，又常稱為西曲瑞克，是一種有效的黃體酮釋放激素抑制素(LH-RH)受體拮抗劑，它能控制卵巢的刺激作用，預防不成熟卵泡過早排出，幫助受孕，因此常作注射用西曲瑞克制劑。抗癌藥醋酸醋酸西曲瑞克是一種新合成的促性腺激素釋放激素(GNRH)拮抗劑，通過與內源性LHRH競爭垂體細胞上的膜受體，從而控制黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)的釋放，推遲女性LH峰的出現，進而控制排卵。

醋酸西曲瑞克通過劑量依賴抑制腦垂體腺的黃體生成激素(LH)和卵泡刺激素(FSH)的分泌，抑制作用是直接的，并通過連續的治療來維持，不引起黃體激素受體活性在初始時高漲隨后下調。醋酸西曲瑞克作為第三代GnRHA有其獨特的藥物動力學和穩定性，大量研究表明，醋酸西曲瑞克對卵巢癌、前列腺癌、子宮纖維瘤、子宮內膜異位等疾病有較好的療效，而且對良性前列腺肥大和卵巢過度刺激綜合征有預防和改善作用。

醋酸西曲瑞克及其類似物的制備方法早期主要是液相合成工藝，操作復雜，難以純化，不利于工業生產、應用價值不高；目前在國內外關于醋酸西曲瑞克合成報道不多，專利CN101284863A以Fmoc-Linker-MBHA-Resin為起始原料，以Fmoc保護基的氨基酸為原料，使用20％哌啶/DMF溶液進行脫保護，并以醋酐/比啶/二氯甲烷混合溶液進行乙酰化，經切割沉降得到醋酸西曲瑞克粗品；該合成方法中常用到有毒試劑吡啶，吡啶易燃，有強烈刺激性，能麻醉中樞神經系統，對眼及上呼吸道有刺激作用，長期吸入會出現頭暈、頭痛、失眠及消化道功能紊亂。

醋酸西曲瑞克

應用^[3]

醋酸西曲瑞克是一種合成的十肽，主要應用于輔助生育技術，對控制性卵巢刺激的患者，防止提前排卵，醋酸西曲瑞克又常稱為西曲瑞克，西曲瑞克是促性腺激素釋放激素(GnRH)拮抗劑，能與內源性LHRH競爭性地結合垂體細胞膜上的受體，從而抑制垂體分泌黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)呈劑量依賴性。西曲瑞克無起始刺激效應，用藥后即產生抑制，持續治療可持續此抑制作用。西曲瑞克用于女性，可延遲LH峰從而推遲排卵。

對于卵巢刺激的婦女，本品的作用時間呈劑量依賴性，單劑量給予西曲瑞克3mg，對其抑制作用進行了為期至少4天的評估，在第4天，抑制作用約為70％，每24小時重復給予0.25mg西曲瑞克，也可維持其作用。動物試驗及人體試驗均顯示，停止注射后，內源性的LH及FSH的分泌可迅速恢復。

檢測方法^[2]

步驟1，稱取醋酸西曲瑞克，加乙腈溶解，再用乙腈與硫酸鹽緩沖溶液稀釋，制成雜質對照品溶液；步驟2，稱取醋酸西曲瑞克，加乙腈使溶解，再用乙腈與硫酸鹽緩沖溶液稀釋，配制成含西曲瑞克的溶液；步驟3，取雜質對照品溶液和供試品溶液分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積分別計算各雜質的含量；本方法有效地解決了分離及其制劑的有關物質的問題，本方法專屬性強，重復性好，能保證及其制劑的中有關物質的可控性。

制備

1.保護氨基酸的活化方法

以Fmoc-D-Ala-氨基樹脂的縮合為例，按照計算的理論氨基酸投料量稱取22.36mgFmoc-D-Ala-OH和20.74mgHBTU于離心管中，加入2mlDMF將其溶解，再用移液槍取10ulDIEA加入到離心管中，混合均勻得到活化的保護氨基酸溶液。

2.脫保護后樹脂的洗滌方法

用真空泵將反應器中的脫保護溶液抽干，然后加入1/3～1/2反應器體積的DMF溶液，置于30r/min的脫色搖床上搖1min，抽干反應器中溶液再加入DMF洗滌，重復操作3次。

茚三酮顯色檢測合格后，將上述活化的保護氨基酸溶液加到抽干的反應器中，再將反應器置于25℃的恒溫震蕩器中反應20～30min。采用上述同樣方法，依次縮合第2～10個Fmoc-保護氨基酸，即得到西曲瑞克前體肽I-氨基樹脂。

3.西曲瑞克粗肽III的粗品收率

切割沉降后的粗品呈乳膠狀態，其中含有較多的TFA鹽和切割試劑，本發明采用C18色譜柱進行除鹽，以便計算粗品得率。

4.醋酸西曲瑞克IV的制備

將西曲瑞克粗品III溶解并過濾，采用rHPLC法制備純化，制備條件為：5umC18制備柱，流動相為A(0.1％乙酸/水)/B(0.1％乙酸/乙腈)，流速9ml/min，檢測波長214nm，收集目標樣品并凍干得到西曲瑞克多肽；將西曲瑞克多肽用1％醋酸溶解，加入到強陰離子交換樹脂中室溫攪拌吸附1h，取出吸附液補加醋酸含量到5％送凍干，經稱量得到醋酸西曲瑞克純品31.2mg，純度達到99.613％，純品收率為41.2％；分別稱取轉鹽前后的西曲瑞克多肽各1mg，按藥典方法測定醋酸含量，轉鹽前醋酸含量為1.56％，轉鹽后醋酸含量為6.9％，符合藥典要求(醋酸含量范圍4％～8％)，目標物醋酸西曲瑞克產品合格。

樣品純化^[2]

步驟1、樹脂處理：陰離子樹脂處理成醋酸根型的陰離子樹脂；

步驟2、轉鹽：西曲瑞克粗品加水溶解，加入步驟1所得的醋酸根型的陰離子樹脂，在溫度為25～30℃的條件下攪拌，控制溶液的pH為2.5～3.5，過濾收集濾液；

步驟3、純化：反相色譜柱用流動相平衡，所述流動相由流動相A和流動相B組成，所述流動相A為水溶液，所述流動相B為乙腈溶液，所述流動相A和所述流動相B均加入質量百分數為0.1％～1％的醋酸溶液，將步驟2所得的濾液上樣、洗脫，并分段收集洗脫液，洗脫液濃縮后凍干或直接凍干，獲得粉末狀醋酸西曲瑞克純品。

主要參考資料

[1]張競, 徐曉月, & 何燕. (2015). 注射用醋酸西曲瑞克的非臨床安全性評價. 中國藥業(11), 3-6.

[2] 姜晶晶, 高姍姍, 張洋, & 于娜. (2015). 注射用醋酸西曲瑞克用于輔助生殖91例臨床評價. 中國藥業, 24(23), 38-40.

[3] 門鴻芹. (2015). 克羅米芬與醋酸西曲瑞克在促排卵中抑制LH峰效果的比較. (Doctoral dissertation, 新疆醫科大學).