122-16-7/磺胺硝苯的含量測定方法

背景及概述^[1]

磺胺硝苯是一種磺胺類化合物。磺胺類化合物是一類極其重要的化合物，尤其是在天然產物、藥物分子中被廣泛應用。為保障食用者的安全我國及歐盟規定肉類食品中的磺胺類藥物的最高殘留限量（maximum residue limit，MRL） 為：單一磺胺類藥物25.0 μg/kg， 磺胺類藥物總量100.0 μg/kg。

制備^[1]

向反應管中加入對二硝基苯(0.2mmol)，焦亞硫酸鈉(0.6mmol，3.0equiv)，4-乙酰胺基苯硼酸(0.3mmol，1.5equiv)，氯化膽堿(0.2mmol，1.0equiv)，磷酸鋰(0.4mmol，2.0equiv),抽空換氮三次后加溶劑DMF(2.0mL)，反應體系加熱至130℃反應10小時。至硝基化物全部轉化完全后，將反應體系冷卻至室溫，加水淬滅，乙酸乙酯(10mL*3)萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，柱層析分離得到純化的目的產物磺胺硝苯(50％)。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO)δ11.19(s,1H),10.36(s,1H),8.16–8.09(m,2H),7.84–7.77(m,2H),7.78–7.72(m,2H),7.33–7.24(m,2H),2.05(s,3H).；¹³CNMR(100MHz,d6-DMSO)δ168.6,143.8,143.2,141.9,131.8,127.6,124.9,118.3,117.3,23.6.

含量測定^[2]

液相色譜-串聯質譜負離子模式測定雞肉中磺胺硝苯的殘留，方法如下：

1.材料與試劑

雞肉樣品購于淮安蘇果超市。磺胺硝苯（純度為98%）德國Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇、乙酸乙酯均為色譜純美國默克公司；正己烷、甲酸均為色譜純美國天地公司；無水硫酸鈉為分析純南京化學試劑有限公司；水為超純水。

2.儀器與設備

TSQQuantumUltraEMR串聯質譜儀（配有電噴霧離子（electrosprayionization，ESI）源）、Surveyor液相色譜系統（包括自動進樣器Autosampler1.3）、MSPump2.0質譜泵美國ThermoFisher公司；ZORBAXSB-C18色譜柱美國Agilent公司；氮吹儀美國Organomation公司；超純水器美國Millipore公司；離心機美國Sigma公司；超聲波清洗儀寧波新芝生物科技公司。

3.方法

3.1標準溶液配制

準確稱取磺胺硝苯標準品10.00mg，用甲醇溶解并定容至10mL，配成1.0g/L標準儲備液，于冰箱中冷凍避光保存，實驗中根據需要用甲醇稀釋至適當質量濃度的標準工作液。

3.2樣品提取

準確稱取（5.00±0.05）g樣品于50mL離心管中，加入10mL甲酸-乙酸乙酯（2∶98，V/V），于渦旋混合器上混勻1min，超聲波提取10min；以8000r/min的速率離心3min，轉移上層有機溶液至20mL氮吹管中；再用8mL甲酸-乙酸乙酯（2∶98，V/V）重復提取殘渣1次，合并2次提取液于氮吹管中，于45℃水浴中氮吹至干，用1.0mL甲醇-水（2∶8，V/V）溶解，加入1.0mL正己烷溶液，渦旋混勻，10000r/min離心3min，下層溶液經0.22μm濾膜過濾至進樣瓶中，供液相色譜-串聯質譜儀分析。

3.3HPLC-MS/MS條件

HPLC條件：AgilentZORBAXSB-C18色譜柱（150mm×2.1mm，3.5µm）；進樣量：25μL；柱溫：30℃；流動相：A為5mmol/L乙酸銨，B為甲醇；梯度洗脫條件：0～4min70%A；4.1～6.5min20%A；6.6～8.5min70%A；流速：250μL/min。MS/MS條件：采用ESI源；負離子方式掃描；噴霧電壓：2500V；離子源溫度：400℃；鞘氣：40bar，

輔助氣：15bar；毛細管溫度：350℃；多反應監測（multiplereaction monitoring，MRM）方式檢測；優化質譜條件見表1。

參考文獻

[1][中國發明]CN202010157997.7磺胺類化合物及其無金屬催化的構建方法和應用

[2]魏云計,朱臻怡,馮民,王小晉,何健,張伶俐,魏斌,丁濤.液相色譜-串聯質譜負離子模式測定雞肉中磺胺硝苯的殘留[J].肉類研究,2016,30(08):35-38.