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中草藥引致肝損傷是當(dāng)代藥物不良反應(yīng)監(jiān)測(cè) 中特別值得關(guān)注的問(wèn)題[1]。然而，由于中草藥成分 繁多且復(fù)雜，一般難以開(kāi)展中草藥毒性標(biāo)志成分的 檢測(cè)研究。分析眾多的中草藥毒性成分研究現(xiàn)狀， 目前主要明確吡咯烷生物堿(PA)是導(dǎo)致肝小靜脈 閉塞病(HVOD)的重要的植物性肝毒性成分[2]。 如果能從這類(lèi)比較明確的草藥肝毒性成分研究入 手，有助于深入闡明中草藥的毒性及其現(xiàn)代檢測(cè)方 法，促進(jìn)我國(guó)中草藥肝毒性鑒定研究走向國(guó)際前沿。
PA廣泛分布于自然界的多種植物群中，據(jù)統(tǒng) 計(jì)大約3％的有花植物(共約6 000余種)含有PA， 主要分布于紫草科、菊科、豆科、蘭科等。PA多數(shù) 由具有雙稠吡咯啶環(huán)的氨基醇(裂堿)和有機(jī)酸(裂 酸)兩部分縮合形成。在雙稠吡咯啶環(huán)的1，2位為 雙鍵的PA，具有肝臟毒性，如野百合堿和千里光 堿。迄今為止已從植物中分離出120余種具有肝毒 性的PA，是目前已知的最重要的植物性肝毒性成 分之一[2|。
攝入含有PA的中草藥后，吡咯類(lèi)生物堿可通 過(guò)兩條代謝途徑在肝臟代謝：一條是通過(guò)混合功能 氧化酶系統(tǒng)形成N一氧化物，另一條是通過(guò)細(xì)胞色素 P450的脫氫作用形成脫氫生物堿或吡咯類(lèi)物質(zhì)。 PA本身及其常規(guī)水解產(chǎn)物對(duì)機(jī)體并無(wú)毒性，但當(dāng) 其到達(dá)肝臟后。在細(xì)胞色素P450的催化下，首先被 氧化為不穩(wěn)定的脫氫吡咯烷生物堿(DHP)，DHP 可進(jìn)一步被水解為脫氫裂堿(DHN)。DHP和 DHN具有很強(qiáng)的親電性，能與肝臟中的大分子如 DNA／RNA等結(jié)合而影響蛋白質(zhì)合成與細(xì)胞分裂， 二者可與谷胱甘肽(GSH)或半胱氨酸反應(yīng)形成毒 性較弱或無(wú)毒的產(chǎn)物。當(dāng)GSH含量減少時(shí)，毒性 物質(zhì)形成增加，從而導(dǎo)致細(xì)胞受損[3]。肝小葉第Ⅲ 帶肝細(xì)胞含有豐富的細(xì)胞色素P450，但GSH含量 較低，該區(qū)帶的竇狀隙內(nèi)皮細(xì)胞(SEC)的GSH含量 則更低，由此決定了第Ⅲ帶SEC及其肝細(xì)胞容易受 到有毒物質(zhì)的損傷H]。有研究發(fā)現(xiàn)，屬于PA類(lèi)的 野百合堿在肝臟通過(guò)細(xì)胞色素P450代謝成烷化劑 脫氫野百合堿后，抑制了呼吸鏈復(fù)合體I中NADH 脫氫酶的活性，從而引起動(dòng)物和人的肝臟損傷，該 機(jī)制可能與半胱氨酸巰基被代謝產(chǎn)物修飾而引起 的呼吸鏈復(fù)合體I構(gòu)象的改變有關(guān)。
目前已有的含PA中草藥肝毒性的檢測(cè)方法包 括體外和體內(nèi)兩種途徑。體外途徑是從可疑的致 毒性草藥中提取總生物堿，再應(yīng)用液相色譜一質(zhì)譜 (HPLC／MS)聯(lián)用等色譜分析方法，測(cè)定是否含有PA成分，以期為HVOD診斷提供間接診斷依 據(jù)[7]。體內(nèi)途徑是通過(guò)檢測(cè)患者的血液或尿液等生 物樣本，應(yīng)用色譜分析方法分析鑒定血樣中的PA 成分及其含量。
在分析PA體內(nèi)代謝過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)肝臟細(xì) 胞色素P450代謝生成的DHP和DHN也進(jìn)入血液 循環(huán)，與血漿蛋白半胱氨酸殘基的巰基結(jié)合。由 于與血漿蛋白結(jié)合后可使PA代謝物體內(nèi)半衰期明 顯延長(zhǎng)，因此若能發(fā)現(xiàn)與PA代謝物作用后的特異 性血漿蛋白改變，則有可能作為檢測(cè)含PA草藥肝 毒性的理想檢測(cè)標(biāo)志。近期研究報(bào)道[1 5|，將馬血液 與PA活性成分野百合堿體外處理后，經(jīng)蛋白質(zhì)組 學(xué)方法全景式分析發(fā)現(xiàn)，馬血清蛋白譜中出現(xiàn)一種 高分子量的蛋白質(zhì)聚合物；再經(jīng)質(zhì)譜法分析以及免 疫印跡法(western blotting)檢測(cè)，確認(rèn)其主要成分 為纖維蛋白原、血清白蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白，它們與PA 代謝產(chǎn)物交叉結(jié)合，形成了高分子量蛋白質(zhì)聚合 物。檢測(cè)這種存在于血液中的高分子量蛋白質(zhì)聚 合物，有可能作為馬食用含PA植物的標(biāo)志性證據(jù)。 因此認(rèn)為，在嚙齒類(lèi)動(dòng)物以及人體相關(guān)疾病狀態(tài) 中，PA也可以改變血漿蛋白的結(jié)合狀態(tài)，采用蛋白 質(zhì)組學(xué)全景式分析等技術(shù)手段，有可能尋找發(fā)現(xiàn)其 特異性結(jié)構(gòu)變化，以期作為檢測(cè)PA的體內(nèi)生化標(biāo) 志物。
在我國(guó)中草藥使用廣泛，其肝毒性問(wèn)題愈發(fā)突 出。目前已明確PA是導(dǎo)致HVOD的重要的植物 性肝毒性成分。HVOD缺乏特異性臨床表現(xiàn)，影像 學(xué)檢查雖可提供重要參考信息，但確診主要依靠肝 穿刺活檢。由于患者一般難以接受肝臟活檢，因此 需要建立和完善鑒定PA體外和體內(nèi)檢測(cè)方法，以 期達(dá)到理想的無(wú)創(chuàng)傷性檢測(cè)目的。 體外檢測(cè)中，判定可疑藥物是否含有PA成分， 可以通過(guò)各種色譜法、色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法等方法進(jìn)行 分析，技術(shù)手段已日趨成熟。體內(nèi)檢測(cè)中，蛋白質(zhì) 組學(xué)研究方法更具發(fā)展前景。借鑒國(guó)外報(bào)道的馬 血液經(jīng)PA體外處理后的蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果，若 能確定與HVOD相關(guān)的血漿蛋白質(zhì)成分結(jié)構(gòu)變化 和(或)表達(dá)差異點(diǎn)，則可以為建立敏感、準(zhǔn)確的肝 毒性PA體內(nèi)檢測(cè)技術(shù)奠定基礎(chǔ)。
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