136112-00-0/苯酚 – 氯仿 – 異戊醇混合物的應用

概述^[1]

苯酚 - 氯仿 - 異戊醇混合物又叫酚-氯仿-異戊醇混合物，是指由上述三種試劑組成的混合物。

應用^[1]

高效提取土壤微生物DNA的方法，包括如下步驟：

(1)稱取0.3-0.4g樣品加入Lysing Matrix E Tube中。加入978μl的SPB，加入122μ l的MT Buffer；

(2)蓋緊Lysing Matrix E Tube的蓋子，將離心管置于渦旋混合儀上，對管內物質進行震蕩破碎均質化，時間設定為40-50s。在8000r/min轉速下離心15min。

(3)將上清液用大槍頭吸出轉入2ml的微離心管中，加入等體積的酚-氯仿-異戊醇 (25:24:1)，顛倒混勻，15℃，10000rpm，離心10min；

(4)轉移上清至干凈的離心管中，加入等體積的氯仿-異戊醇(24:1)，顛倒混勻，15 ℃，10000rpm，離心10min，取上清；

(5)加入250μl的PPS，顛倒混勻10次以上，室溫靜置10min；

(6)在8000r/min轉離心5min，用大口槍頭將上清液轉移至2ml離心管；

(7)吸取800μl的搖勻Binding Matrix加入上一步中的離心管；

(8)將離心管上下顛倒2min后靜置3min，等待二氧化硅基質沉淀；

(9)移除500μl上清液，避免吸出沉淀物；

(10)將剩余的上清液與沉淀物重新混勻，吸取約600μl混合液移入SPIN Filter 中，8000r/min轉下離心1min；

(11)倒掉收集管中的液體，重復上一步操作直至2ml離心管中的液體吸盡；

(12)加入已制備好的SEWS-M溶液500μl，用小槍頭小心混勻后，8000r/min轉下離 心1min，棄去收集管中的液體；

(13)重復上一步后，將收集管更換為1.5ml的Catch Tube；

(14)在室溫下，將SPIN Filter風干5-10min；

(15)往SPIN Filter中加入80μl的DES溶液，用小槍頭使之與Binding Matrix混 勻，65℃水浴15min。8000r/min轉下離心2min，可得到約50μl的DNA溶液，再加入80μl的DES 溶液重復這一步操作，即可獲得約100μl的土壤微生物DNA溶液。

主要參考資料

[1] [中國發明] CN201711361715.X 一種高效提取土壤微生物DNA的方法