1391054-00-4 / 羥基氯地那非的篩查方法

背景及概述^[1]

羥基氯地那非是一種抗疲勞類非法添加化合物。保健食品非法添加是指在保健食品中添加未在配方中申報的品種，比如在減肥類食品中添加西布曲明、酚酞、呋塞米等。由于大多化學藥均是有一定的副作用(化學藥的說明書上都有標注)，尤其在超量使用后可能會產生嚴重的后果，比如藥物依賴、器官損傷，甚至器官衰竭等后果，故化學藥在保健食品中是禁用的。

篩查方法^[1]

(1)標準工作溶液的配制

準確稱取羥基氯地那非標準品適量于10mL容量瓶中，用甲醇或者50％乙腈水溶液溶解并稀釋至刻度，制備得到各化合物的標準貯備液；對于難溶化合物使用二氯甲烷或者鹽酸甲醇(1:99)溶液使其溶解后定容至刻度；

標準工作溶液(1μg/mL)：分別準確吸取標準儲備液適量置于10mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，制成標準工作溶液；臨用新制；

(2)待測樣品的供試品溶液制備

1)固態或半固態試樣

取固態試樣(蛋白粉、牡蠣粉、餅干、糖果、咖啡及含與上述基質相同的保健食品及片劑、膠囊等劑型)適量混勻，研細，或取半固態試樣(果凍)適量混勻，精密稱取1g(精確至0.001g)置于50mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲提取15min，放冷至室溫，用甲醇定容，轉移至50mL離心管中，4 000r/min離心5min，上清液經微孔濾膜過濾，取續濾液，根據實際濃度用乙腈水溶液(1+1)適當稀釋，備用；

2)液態試樣

取試樣(飲料、酒)適量搖勻，準確吸取1mL置于50mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲提取15min，放冷至室溫，用甲醇定容，經微孔濾膜過濾，取續濾液，根據實際濃度用乙腈水溶液(1+1)適當稀釋，備用；

3)油脂基質(軟膠囊)試樣

取試樣(軟膠囊)適量混勻，精密稱取1g(精確至0.001g)置于50mL容量瓶中，加乙酸乙酯5mL，振搖，使其分散，加甲醇適量，超聲提取15min，放冷至室溫，用甲醇定容，轉移至50mL離心管中，4 000r/min離心5min，上清液經微孔濾膜過濾，取續濾液，根據實際濃度用乙腈水溶液(1+1)適當稀釋，備用；

4)空白基質提取液

稱取空白試樣適量，與試樣同法處理，制得空白基質提取液；

5)空白溶液

不加試樣，與試樣同法處理，制得空白溶液；

(3)數據庫建立

將上述羥基氯地那非的標準工作溶液，注入超高效液相色譜-串聯四級桿飛行時間質譜儀進行測定，采集得到各化合物的原始數據圖譜及總離子流圖；

將采集得到的原始數據從masslynx軟件中導出，導入到unifi數據處理軟件中進行數據處理，得到的保留時間、母離子及子離子質譜圖，并根據碎片斷裂機理及斷裂難度，確定特征碎片離子；

(4)定性分析

1)對經過步驟(2)所述方法處理的待測樣品進行超高效液相色譜-串聯四級桿飛行時間質譜分析，將得到的結果與數據庫中的數據進行比較，空白溶劑不能出現與標準溶液相同的離子峰，試樣色譜峰的保留時間與標準溶液的保留時間一致，容許偏差為±0.1min，試樣的母離子及特征碎片離子的精確質量數應與標準溶液的一致，偏差均應小于等于0.05Da，母離子與碎片離子色譜峰的信噪比(S/N)都在3:1以上，信噪比以峰對峰(PtP)計算，全掃描光譜記錄時，試樣中特征碎片離子的相對豐度必須超過標準溶液參照的特征離子光譜豐度的10％，篩選出滿足定性條件的化合物，即為疑似陽性樣品；

2)對于疑似陽性樣品，根據化合物的保留時間和分子量編輯MSMS方法，并采集數據，所得到的疑似物質的子離子掃描質譜圖，與標準溶液的子離子掃描質譜圖進行比較，在相同的條件和相近的濃度下，試樣中主要碎片離子相對豐度與標準溶液的相對豐度的允許偏差不超過規定的范圍，則可判定為樣品中存在對應的待測物。

參考文獻

[1] [中國發明] CN202010542102.1 一種保健食品中非法添加化合物的篩查方法