187618-60-6 / Nα-Fmoc-Nω-Pbf-D-精氨酸的制備方法

背景及概述^[1]

N'-[(2,3-二氫-2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-基)磺酰基]-N-芴甲氧羰基-D-精氨酸簡稱Fmoc-Arg(Pbf)-OH。精氨酸是一種可以在體內自然產生的必需氨基酸。在生命科學研究中，為了避免副產物的產生，必須對精氨酸的氨基和胍基進行保護。Fmoc-Arg(Pbf)-OH就是利用Fmoc(9-芴甲氧羰基)保護氨基，用Pbf(2，2，4，6，7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基)保護胍基。

制備^[1]

(1)酯化

a1.將100L無水乙醇加入預先干燥的300L反應釜內，通冰鹽水降溫至-5～-10℃，滴加二氯亞砜13L。

b1.加入D型的Arg.HCl 21.5kg，關閉冰鹽水，自然升溫至室溫反應24小時。

c1.升溫至35℃反應，TLC點板跟蹤反應情況，反應大約48h結束。

d1.濃縮：反應結束后，減壓濃縮得到油狀物的Arg·Oet·2HCl中間體。

(2)引入Boc基團

a2.在300L反應釜內加入150L水，再加入碳酸氫鈉25.2kg，攪拌；

逐漸加入Arg·Oet·2HCl油狀物；加入四氫呋喃30L；分批加入(Boc)2O，26.2kg攪拌，室溫反應；

TLC法點板跟蹤反應情況，當Arg·Oet·2HCl反應完即開始處理。

b2.酸化：反應完成后調節pH 3-4，用石油醚/乙酸乙酯(50L:25L)，萃取；

c2.加鹽飽和，回調PH 6-7，用乙酸乙酯提產品，用飽和食鹽水洗滌有機相。

d2.干燥：向有機相(帶產品的乙酸乙酯溶液中)中加入60kg的無水硫酸鈉，干燥8小時。

e2.提純濃縮：抽濾掉硫酸鈉固體，減壓蒸餾乙酸乙酯相。濃縮后得到的Boc-ArgOet.HCl 油狀物。

(3)引入Pbf

a3.在300L反應釜中加入步驟2得到的Boc-ArgOet.HCl，Pbf-Cl 31.9kg，丙酮200L，碳酸鉀41.7kg，攪拌，加少量水，維持溫度40-45℃，用TLC監測反應，待Boc-ArgOet.HCl完全反應進行抽濾，

b3.抽濾，除去固體不溶物，減壓蒸餾丙酮，濃縮后的得到Boc-Arg(Pbf)Oet油狀物待用。

(4)脫Boc

a4.在干燥的300L反應釜中，加入3N HCl/乙酸乙酯溶液120L，攪拌下加入Boc-Arg(Pbf) Oet油狀物，維持溫度10-15℃，室溫攪拌。

b4.脫Boc完成后，加水洗滌，將產品洗至水相，加適量碳酸鈉調節水相pH7。

(5)皂化

a5.將步驟(4)所得水相加95％乙醇100L，攪拌，滴加10N NaOH水溶液調節pH 11-12 進行皂化。

b5.皂化反應結束后，用6NHCl調節反應液的pH值至7，降溫至-10-0℃冷凍結晶；離心，固體用乙酸乙酯攪洗一次，離心甩干收集固體；重結晶得到H-Arg(Pbf)OH固體。

(6)Fmoc-Arg(Pbf)-OH合成

a6.在反應釜中加入H-Arg(Pbf)-OH，水120L、THF，用Na2CO3調節PH＝8.5。

b6.逐漸加入Fmoc-Osu(芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺)，控制溫度15-20℃，PH＝8-9以把Arg(Pbf) 反應完，盡量避免Fmoc-Osu過量。

TLC點板跟蹤反應情況，從加完Fmoc-Osu開始計算，反應時間6小時。

c6.純化：用石油醚/乙酸乙酯(2:1)萃取；水相用HCl酸化至pH＝3，攪拌2小時。酸化溫度0-10℃；加乙酸乙酯萃取產品；用飽和食鹽水洗至pH達到6；無水硫酸鈉干燥，真空抽濾除去固體，濾液濃縮，減壓濃縮得到固體，真空干燥得到產品。

產品純度99.6％，最大單雜0.09％，L型異構體0.15％。

參考文獻

[1] [中國發明,中國發明授權] CN201710305099.X Fmoc-Arg（Pbf）-OH的合成方法【公開】/Fmoc-Arg（Pbf）-OH的合成方法【授權】