28983-56-4 / 苯胺藍(水溶)的應用

概述^[1]

苯胺藍(水溶)(AinlinblueW.5.,AnB)曾用作酸堿指示劑,在生物學和醫學中用作神經組織、細胞質等的染色劑川,未見用作分析試劑的報道。試驗發現,在pH2.1的Brit-otoRoibnson緩沖介質存在的苯胺藍(水溶)溶液中加人BSA,溶液發生減色效應。可以作為蛋白質的吸光探針。在最佳反應條件下,苯胺藍(水溶)溶液的最大吸收峰在600nm,苯胺藍(水溶)與BSA相互作用形成復合物后,溶液發生減色,其最大吸收峰仍在600nm波長處,以試劑空白為參比時,在600nm波長處形成一波谷,在678nm波長處形成一波峰,波峰和波谷的吸光度絕對值均與BSA的濃度呈良好的線性關系,可用于蛋白質的定量測定。

應用^[3]

苯胺藍(水溶)熒光染色法觀察匍匐翦股穎葉片組織

S1、進行藥品的配制；

S11、將福爾馬林10ml、乙酸3ml、50％的乙醇87ml、5ml甘油混合均勻，得FAA固定液；

S12、將無水乙醇與二甲苯以1：1的比例混合配制成1/2二甲苯；

S13、稱取0.1g苯胺藍(水溶)溶解于100ml濃度為0.07mol/L，pH＝7的磷酸緩沖液中，得0.1％的苯胺藍(水溶)熒光染色劑。

S2、制作石蠟切片；

S21、用鋒利的刀片快速取下寬度約0.8mm的匍匐剪股穎葉片，將葉片切割成長度約5mm左右小段，放入青霉素小瓶中，加入步驟S11所得的FAA固定液，固定12h；

S22、經FAA固定后，依次置換15％、30％、50％、70％、85％乙醇中進行梯度脫水，各脫水20min，于95％乙醇中脫水30mim，無水乙醇中脫水兩次，各20min；然后依次置換1/2二甲苯、二甲苯進行透明，于1/2二甲苯中透明1h，二甲苯中透明兩次，每次30min，至材料完全透明為止；

S23、在裝有所得透明材料的青霉素小瓶中加碎蠟兩次，第一次加入與瓶中二甲苯等量的碎蠟，放入電熱鼓風干燥箱中溫度36℃保持1h至所加碎蠟完全融化后，加入瓶中液體一半的碎蠟，放入電熱鼓風干燥箱中調節溫度至36℃過夜后，調節溫度至42℃，置換50％石蠟保持1h后，溫度調至50℃，置換75％的石蠟保持30min后，調節溫度至60℃，依次置換純石蠟A、純石蠟B、純石蠟C各30min，然后采用TKY-BMB型石蠟包埋機進行包埋，一個蠟塊中一個材料，蠟塊的尺寸為：0.5cm×0.5cm×0.5cm，將包埋好的蠟塊冷卻后直接修塊，進行切片或保存到4℃冰箱備用；

S24、采用輪式手動切片機進行連續切片，厚度10μm；將HH-6數顯恒溫水浴鍋溫度調節至45℃，在500ml大燒杯加入蒸餾水放入水浴鍋中，將切好的蠟帶放入燒杯中，待蠟帶完全展開后，將涂抹好蛋清甘油的載玻片伸入燒杯中，使蠟帶粘到載玻片上，將粘有蠟帶的載玻片自然晾干后，在光學顯微鏡下觀察展片效果，取展片效果好的片子置于電熱鼓風干燥箱中于38℃下烘烤，直到片子完全干燥；

S25、取干燥的片子，依次放到分別加有二甲苯、1/2二甲苯、95％的乙醇、85％的乙醇、70％的乙醇、50％的乙醇、30％的乙醇、磷酸緩沖液、0.1％的苯胺藍染色劑的立式染缸中；在二甲苯、1/2二甲苯中各5min，95％的乙醇、85％的乙醇、70％的乙醇、50％的乙醇、30％的乙醇中各5S，磷酸緩沖液中10min，0.1％的苯胺藍(水溶)染色劑中30min；然后將染色后的片子取出，置于蒸餾水中30S，洗凈片子上的雜質后，過1/2二甲苯、二甲苯各10S，待片子干燥后采用中性樹膠封片；

S26、將所得的片子自然風干后，置于LeiCaDM6000B熒光顯微鏡下觀察并拍照。

主要參考資料

[1] 黎雪蓮, 袁若, 柴雅琴, 張凌燕, 王娜, & 朱強. (2006). 基于靜電吸附甲苯胺藍和納米金固定過氧化物酶生物傳感器的研究. 分析化學, 34(3), 389-392.

[2] 肖錫林, 王永生, 李貴榮, & 呂昌銀. (2004). 甲苯胺藍共振光散射法測定納克級脫氧核糖核酸. 光譜學與光譜分析, 24(2), 190-193.

[3] 趙香汝, 王家鑫, & 崔平. (2000). 肥大細胞用甲苯胺藍染色之體會. 中國組織化學與細胞化學雜志, 9(3), 359-359.