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麥芽五糖是一種低聚糖，其甜度較低，對(duì)腸道內(nèi)腐敗菌有抑制作用，被廣泛用于食品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。蜂蜜為蜜蜂科昆蟲中華蜜蜂Apis cerana Fabricius或意大利蜂Apis mellifera Linnaeus所釀的蜜。近年來(lái)，在天然蜂蜜中摻入各種低廉的果葡糖漿、麥芽糖漿等摻雜蜂蜜的情況十分嚴(yán)重，以富含淀粉的植物，通過(guò)水解制取果葡糖漿等水解糖漿，因水解糖漿類會(huì)存在水解不完全的寡糖成分，如麥芽五糖及分子量更高的糖類化合物；而天然蜂蜜中不含有五糖及分子量更高以上的寡糖，因此通過(guò)研究麥芽五糖的分析檢測(cè)方法，可以為蜂蜜的防偽檢驗(yàn)提供新的思路。
利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)麥芽五糖的方法，可以通過(guò)下列步驟來(lái)實(shí)現(xiàn)：
（1）取麥芽五糖適量，加水溶解，配置成一定濃度的供試品溶液；
（2）進(jìn)樣，按以下色譜條件和質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)；
色譜條件為：色譜柱：Waters Xbridge BEH Amide 2.1x100mm；流動(dòng)相：乙腈-水梯度洗脫，0～15min 保持87％乙腈，15～20min 由87％乙腈逐漸下降至15％乙腈，20～30min保持15％乙腈；流動(dòng)相中的百分比為體積百分比；
質(zhì)譜條件為：ESI源，選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式，碎裂電壓（Fragmentor）：130v，鞘氣流速（Sheath gas flow）：12L/min，毛細(xì)管電壓（Caplliary）：4000v，提取精確質(zhì)量數(shù)[M-H] 827.4，運(yùn)用濃度與峰面積的常用對(duì)數(shù)進(jìn)行線性定量。
具體的色譜條件中，流速為0.2~0.8mL/min；柱溫為37~42℃；進(jìn)樣量為0.1~1μL；優(yōu)選的色譜條件為：流速為0.4mL/min；柱溫為40℃；進(jìn)樣量為0.5μL。
一種制備麥芽五糖的方法，所述方法采用直鏈麥芽低聚糖生成酶和普魯蘭酶，水解淀粉或麥芽糊精生成含直鏈麥芽五糖的低 聚糖漿。具體步驟為：配制pH 6.0的10％麥芽糊精(DE＝6)溶液為底物，以100U/g加酶量加入麥芽低聚糖生成酶(氨基酸序列在GenBank中的編號(hào)為AIV43245.1)，以2U/g加酶量加入普魯蘭酶，在 60℃下反應(yīng)24～72h，反應(yīng)結(jié)束后沸水浴40min滅酶，用高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測(cè)法(HPAEC-PAD)測(cè)定樣品。此時(shí)主產(chǎn)物麥芽五糖含量均達(dá)43％以上，底物轉(zhuǎn)化率為90.2％～ 99.8％，而葡萄糖含量均在10％以內(nèi)，DP值8及以上的直鏈低聚糖未檢出，說(shuō)明反應(yīng)體系中底物已被水解充分，少量未被轉(zhuǎn)化的底物可能以極限糊精的形式存在，方便分離。
所用的直鏈麥芽低聚糖生成酶由食品級(jí)枯草芽孢桿菌表達(dá)，安全無(wú)毒。該熱穩(wěn)定性好，且比酶活高，可以水解淀粉或麥芽糊精生成含40％以上麥芽五糖的直鏈麥芽低聚糖漿，同時(shí)葡萄糖含量在10％以內(nèi)。可用于分離純化得到高純度的直鏈麥芽五糖，或作為功能性飲料的甜味劑，具有一定的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力；所用的雙酶法對(duì)底物的轉(zhuǎn)化率和主產(chǎn)物麥芽五糖的純度較高，分別達(dá)到 90％和40％以上，可以有效降低高純度直鏈麥芽五糖的生產(chǎn)加工成本，從而更具有工業(yè)應(yīng)用價(jià)值；所提供的生產(chǎn)直鏈麥芽五糖糖漿的方法，和其他生產(chǎn)淀粉糖的方法相比，不需要添加α-淀粉酶用于液化，可由直鏈麥芽低聚糖生成酶本身進(jìn)行淀粉液化和糖化，同時(shí)，所用的普魯蘭酶和直鏈麥芽低聚糖生成酶的使用溫度范圍和pH范圍有重合，可以同時(shí)加入，此外也不需要在生產(chǎn)過(guò)程中調(diào)節(jié)溫度和pH，相對(duì)而言工藝更為簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、便捷。
[1] CN201811090788.4利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)麥芽五糖的方法
[2] CN201810219837.3一種用雙酶法制備直鏈麥芽五糖的方法