40077-57-4 / 醋酸阿肽地爾的制備

概述^[1]

醋酸阿肽地爾又稱血管活性腸肽，是一種含有28個氨基酸的多肽。其氨基酸機構如下所示：

His?Ser?Asp?Ala?Val?Phe?Thr?Asp?Asn?Tyr?Thr?Arg?Leu?Arg?Lys?Gln?Met?Ala?Val?Lys?LysTyr?Leu?Asn?Ser?Ile?Leu?Asn。

醋酸阿肽地爾是從小腸粘膜提取的一種直鏈肽，其氨基酸排列為一部分胰高血糖素(glucagon)和催胰液素(secretin)，具有可使血管舒張降低血壓的作用，從肝動脈開始，對內臟血管具有較強的作用能力。對腸液的分泌具有很強的促進作用，對胃液的分泌可起抑制作用；對消化道平滑肌的收縮產生抑制作用。

應用^[3]

醋酸阿肽地爾為MondobiotechAG和BiogenIdec公司開發出來，是由28個氨基酸組成的線性肽。主要用于急性呼吸窘迫綜合癥和特發性肺纖維化治療，其效果較好且副作用小，是一種很有市場前景的多肽藥物。

制備^[2]

目前醋酸阿肽地爾常規合成方法為逐個偶聯方法，其他合成方法還未有報道，有關其劑型和應用的報道比較常見，如專利CN101247794為醋酸阿肽地爾液體藥物制劑及其用于制備治療肺動脈高壓、急性呼吸窘迫綜合癥等疾病的藥物的用途專利；US7468353為在治療非典型肺部感染中的用途專利。然而，用逐個偶聯法在制備醋酸阿肽地爾的過程中，合成周期長，雜質較多，收率和純度無法達到較高水平，特別是合成His1和Ser2時，逐個偶聯法極易產生消旋雜質，并且雜質通過純化方法難以去除，導致醋酸阿肽地爾產品純度的降低而雜質D?His1?醋酸阿肽地爾以及D?Ser2?醋酸阿肽地爾含量過高，影響產品品質。

具體實施方法：

方法一：

步驟1、固相合成在SEQIDNO:1所示氨基酸序列Lys側鏈上、Tyr側鏈上、Asn側鏈上、Ser側鏈上偶聯有保護基且在C端偶聯有樹脂的多肽片段樹脂Ⅰ；

固相合成在SEQIDNO:2所示氨基酸序列N端、Tyr側鏈上、Thr側鏈上、Arg側鏈上、Lys側鏈上、Gln側鏈上偶聯有保護基且在C端偶聯有樹脂的多肽片段樹脂Ⅱ；

固相合成在SEQIDNO:3所示氨基酸序列N端、Asp側鏈上、Thr側鏈上、Asn側鏈上偶聯有保護基且在C端偶聯有樹脂的多肽片段樹脂Ⅲ，然后脫除多肽片段樹脂Ⅲ的N端保護基與Boc?His(3?Bum)?Ser(Psi(Me,Me)pro)?OH偶聯得到多肽片段樹脂Ⅳ；

步驟2、加入裂解液去除多肽片段樹脂Ⅱ和多肽片段樹脂Ⅳ的樹脂，對應得到多肽片段Ⅱ和多肽片段Ⅳ，然后將多肽片段Ⅱ的C段與多肽片段樹脂Ⅰ的N端偶聯，接著將多肽片段Ⅳ的C段與脫除N端保護基的多肽片段Ⅱ的N段偶聯，得到醋酸阿肽地爾樹脂；

步驟3、加入裂解液去除醋酸阿肽地爾樹脂中的樹脂和所有保護基，獲得醋酸阿肽地爾粗品，經RP?HPLC純化后獲得醋酸阿肽地爾純品。

其中，作為優選，步驟2所述偶聯采用PyBOP/HOBt/DIPEA三試劑偶聯體系、HOAt/DIPCDI雙試劑偶聯體系、HOBt/DIPCDI雙試劑偶聯體系、HATU/HOAt/DIPEA三試劑偶聯體系、TBTU/HOBt/DIPEA三試劑偶聯體系、或HBTU/HOBt/DIPEA三試劑偶聯體系偶聯。步驟2所采用的偶聯體系各偶聯試劑之間的摩爾比優選為：

PyBOP:HOBt:DIPEA為1:1.2:2，HATU:HOAt:DIPEA為1:1.2:2，HBTU:HOBt:DIPEA為1:1.2:2，TBTU:HOBt:DIPEA為1:1.2:2，HOAt:DIPCDI為1.2:1.2，HOBt:DIPCDI為1.2:1.2；

方法二：

步驟1，通過液相法合成二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH；

步驟2，采用固相合成法，以RinkAmideMBHA氨基樹脂為起始樹脂，按照醋酸阿肽地爾主鏈肽序依次偶聯具有N端Fmoc保護且側鏈保護的氨基酸，其中23、24位和27、28位氨基酸偶聯采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶聯，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH；

步驟3，肽樹脂裂解，純化，凍干后得到醋酸阿肽地爾。

其中，步驟1所述的二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH的合成方法包括如下步驟：1）Fmoc-Leu-OH、HOSu和DCC偶聯得到Fmoc-Leu-OSu，然后Fmoc-Leu-OSu和H-Asn-OH反應得到二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH。

其中，步驟2所述的固相合成方法，所述方法包括以下步驟：1）采用0.10~0.90mmol/g的氨基樹脂為起始樹脂；2）采用由體積比為1:4的哌啶和DMF組成的去保護液脫除氨基樹脂上的Fmoc保護基；3）在偶聯劑系統的存在下，氨基樹脂和Fmoc-Leu-Asn-OH偶聯得到Fmoc-Leu-Asn-氨基樹脂；4）重復步驟2）、3），按照醋酸阿肽地爾主鏈肽序依次偶聯具有N端Fmoc保護且側鏈保護的氨基酸，其中23、24位氨基酸偶聯采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶聯，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH。所述偶聯劑系統包括縮合劑和反應溶劑，所述縮合劑選自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反應溶劑選自DMF、DCM、NMP、DMSO或他們之間的組合。

主要參考資料

[1]楊東暉, 路楊, & 周亮. . 一種制備阿肽地爾的方法.

[2] 張小靈, 閻朗明, 尹剛, 楊建國, & 徐東. (2004). 肝復肽聯合前列地爾治療慢性重型肝炎20例療效初步觀察. 寄生蟲病與感染性疾病, 2(1), 20-20.

[3] 王超. (2011). ATP敏感鉀通道的激活對傷害性疼痛行為以及對DRG的超敏反應的拮抗作用. (Doctoral dissertation, 河北醫科大學).