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472-11-7 / 魯斯可皂苷元的作用

背景及概述[1-2]

麥冬Ophiopogonis Radix 為百合科植物麥冬Ophiopogon japonicus( Linn.f.) Ker -Gawl.的干燥塊根,味甘、微苦,歸心、肺、胃經,有養陰生津、潤肺清心等功效,常用于治療肺燥干咳、陰虛癆嗽、喉痹咽痛、津傷口渴等癥麥冬中所含化學成分主要有皂苷類、黃酮類、氨基酸類、多糖類及揮發油等。研究表明,麥冬有抗心肌缺血、降血糖、抗炎、抗腫瘤、增強免疫等作用。麥冬甾體皂苷是麥冬的主要活性成分,魯斯可皂苷元是其藥材質量控制的關鍵性指標。

魯斯可皂苷元(Ruscogenin),又名假葉樹苷元,魯斯可皂苷元最早是從地中海地區的假葉樹(Ruscus aculeatus L.)中分離得到,也是常用滋陰中藥麥冬(Ophiopogon japonicus ( L.f) Ker-Gawl)的主要有效成分之一。《中華人民共和國藥典》自2010 年版起收載以魯斯可皂苷元作為麥冬總皂苷含量測定質量評價標準物質。

結構

魯斯可皂苷元的作用

藥理作用及應用[1]

1.抗炎作用

魯斯可皂苷元具有顯著抗炎作用,魯斯可皂苷元發揮抗炎作用的機制之一可能是通過干擾蛋白激酶C 信號通路進而阻滯淋巴細胞遷移到細胞外基質中。對麥冬水提物進行研究,實驗表明麥冬皂苷D 及其魯斯可皂苷元為其主要活性成分,在體內外具有明顯的抗炎活性,體外可明顯抑制佛波酯誘導的ECV304 細胞與HL-60 細胞的黏附。

進一步考察魯斯可皂苷元對細胞因子TNF-A 誘導的ECV304 細胞與HL-60 細胞黏附的影響,研究表明,魯斯可皂苷元可通過抑制HL-60 細胞與活化的ECV304 細胞之間的黏附作用,發揮抗炎活性。魯斯可皂苷抗炎的分子機制可能與其能抑制炎癥以及血管病變中內皮細胞對細胞因子的反應相關。

研究魯斯可皂苷元對野百合堿誘導的肺動脈高壓大鼠炎癥反應的影響,結果表明魯斯可皂苷元可通過抑制肺血管炎癥反應、降低肺動脈壓及肺小動脈厚度防治肺動脈高壓。魯斯可皂苷元可通過NF-Kappa B 介導的炎癥信號通路減輕實驗性中風的大鼠大腦的缺血損傷。

2.抗血栓作用

魯斯可皂苷元具有抗血栓作用,對于口服二磷酸腺苦的大鼠和小鼠模型,魯斯可皂苷元可以顯著抑制其血小板的聚集,而且通過每日1 次口服魯斯可皂苷元可以劑量依賴性抑制因下腔靜脈結扎而導致的靜脈血栓的形成,為以后臨床血栓性疾病的治療提供依據。

3.抗腫瘤作用

魯斯可皂苷元具有抗腫瘤作用,研究發現從麥冬中提取的魯斯可皂苷元對Hela 和SMMC-7721 細胞均有細胞毒性作用,進而可以起到抗腫瘤的作用。以人肺癌A549 和H460 細胞為研究對象,對周氏克金巖方中麥冬的有效活性成分魯斯可皂苷元進行藥理研究,表明魯斯可皂苷元可抑制人肺癌A549 和H460 細胞的增殖,誘導其凋亡,具體機制可能與其能促進p53、p21 蛋白的表達,降低cyclin E2 和CDK2 蛋白的表達,進而使細胞阻滯于S 期相關。

4. 抗應急作用

魯斯可皂苷元具有腦缺血缺氧保護作用,采用小鼠斷頭致全腦缺血缺氧模型,通過觀察小鼠斷頭呼吸維持時間,考察魯斯可皂苷元抗腦缺氧活性及其量效時效關系;采用雙側頸總動脈結扎再灌注模型,考察魯斯可皂苷元對腦組織含水量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及Na+-K+-ATP 酶活性、Ca2+-ATP 酶活性等生化指標的影響。

研究表明魯斯可皂苷元在一定劑量范圍內,明顯改善小鼠腦缺血缺氧損傷,減輕缺血再灌注導致的腦水腫、氧化損傷和能量代謝障礙,具有起效較快,維持時間較長的作用特點。用線栓法制備大鼠腦缺血-再灌注損傷的動物模型,探討了魯斯可皂苷元預處理對腦缺血-再灌注損傷大鼠的保護作用機制,結果表明:魯斯可皂苷元對缺血-再灌注大鼠腦損傷的保護作用比較明顯,此作用可能是通過提高SOD 的活性,增加其清除自由基能力,減輕氧化損傷以及抑制細胞凋亡來實現。

5. 增強內皮細胞活力作用

此外,魯斯可皂苷元可增強內皮細胞活力,抑制TNF-α 刺激后的白細胞對靜脈內皮細胞的粘附,改善脂多糖誘導急性肺損傷,降低毛細血管通透性、調節前列腺功能失調、抑制G+菌、抗彈性蛋白酶、能降低血清及組織的NO、MDA 水平,改善腦部血液循環等作用,保護各組織免受自由基攻擊,對心、肺作用更明顯并下調肺組織TF 基因表達,具有很好的藥用前景。

制備[2-3]

方法1:取麥冬藥材2 kg,粉碎,過20 目篩,置圓底燒瓶中,用10 倍量80%乙醇加熱回流提取3 次,每次1 h,合并提取液,減壓回收乙醇至無乙醇味,得總皂苷浸膏。采用兩相酸水解法,將總皂苷浸膏置圓底燒瓶中,加入10 倍量5% 硫酸(下層) ,6 倍量石油醚與二氯甲烷( 3 ∶1) 混合液,加熱水解5 h,冷卻后得酸水層和有機層,用等體積的二氯甲烷萃取酸水層3 次,與有機層合并,用水洗至pH 接近7,濃縮至干,得浸膏。

將硅膠( 200 ~300 目)石油醚濕法裝柱。將酸水解得到的浸膏用硅膠( 100 ~200 目) 拌樣,揮干溶劑,干法上樣,進行柱色譜分離。用二氯甲烷-石油醚-甲醇( V ∶V ∶V,10 ∶10 ∶1) 洗脫,收集餾分,根據薄層色譜檢識,合并相同斑點的餾分。含有魯斯可皂苷元的餾分濃縮后放置,析出白色針晶,即為魯斯可皂苷元粗品,粗品用甲醇重結晶多次,即得魯斯可皂苷元純品。

方法2:一種魯斯可皂苷元制備新方法,包括如下步驟:

(1)配制提取液:提取劑為乙醇,甲醇或丙酮中之一,提取劑用鹽酸、硫酸或磷酸中之一調節pH1~2,加入0.5~1%的亞硫酸氫鈉。

(2)魯斯可皂苷元的提取:在多功能提取罐中逆流強制循環提取三次,第一次10倍量(V/W)回流下提取2.0~5.0h;第二次8倍量(V/W)回流下提取1.5~4.0h;第三次6倍量(V/W)回流下提取1.0~2.0h。

(3)提取液中和,濃縮:以飽和氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液將提取液中和至中性,減壓濃縮至比重1.05~1.10,得到魯斯可皂苷元濃縮液。

(4)濃縮物脫脂除雜:以正己烷,石油醚,6號溶劑油,乙醚中之一提取3 次,第一次5倍量(V/W)萃取脫脂,第二次4倍量(V/W)萃取脫脂,第三次3倍量(V/W)萃取脫脂,收集脫脂后的液體,脫脂溶劑回收。

(5)魯斯可皂苷元的萃取:脫脂后液以乙酸乙酯,三氯甲烷,二氯甲烷萃取中之一等體積萃取3~5次,收集萃取液。

(6)萃取液濃縮與反萃取:將萃取液濃縮至一半體積,以等體積的1~5%碳酸鈉或碳酸氫鈉溶液萃取1~3次,棄去堿水液,得到淺黃色的魯斯可皂苷元萃取液。

(7)脫色,濃縮,結晶:加入萃取液5~10%(W/V)的活性炭,在40~60℃加熱30min,趁熱過濾,得到脫色魯斯可皂苷元萃取液,將其濃縮至比重1.10~1.15,放置,結晶

(8)過濾,洗滌,干燥:結晶物過濾后加入正己烷,石油醚,6號溶劑油,乙醚中之一,再滴加少量甲醇或乙醇,攪拌均勻,直至洗去色素為止,真空干燥,得到白色魯斯可皂苷元。

主要參考資料

[1] 魯斯可皂苷元的制備工藝

[2] 魯斯可皂苷元制備方法研究

[3] CN201510009375.9一種魯斯可皂苷元制備新方法

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