479-61-8 / 葉綠素A的制備與含量測定

背景及概述^[1][2]

葉綠素A是一種包含在浮游植物的多種色素中的重要色素。在浮游植物中，占有機物干重的1%〖KG-1.3mm〗～2%，是估算初級生產力和生物量的指標，也是赤潮監測的必測項目。

制備^[2]

高純度葉綠素a的制備方法的具體步驟如下：

取生長至對數生長期后期的鈍頂螺旋藻藻液1L，離心分離 藻體，棄去上清液，沉淀富集在1個離心管中，然后用50mL乙醇萃 取三次，萃取液合并。

萃取液中加入適量石油醚(60～90℃)，加水至分相，含色 素的石油醚相用水洗滌兩次。

在層析柱中填充100-200目中性氧化鋁，先用含0.3％乙醇的 石油醚溶液潤濕氧化鋁柱，然后上樣，再采用0.3％、10％的乙醇－ 石油醚混合溶劑梯度沖洗。先沖出的是橙黃色的類胡蘿卜素，后沖出 的是藍綠色的葉綠素。旋蒸回收溶劑，獲得墨綠色的葉綠素a沉淀。

含量測定^[3-4]

報道一、測定水中葉綠素a的方法，按以下步驟進行：

一、取50～200ml水樣，采用0.45μm醋酸纖維濾膜進行過濾，真空泵壓力控制在 0.05MPa，獲得截留有藻細胞的濾膜；

二、將截留有藻細胞的濾膜剪碎放入裝有6ml體積 濃度為90％的乙醇溶液的離心管中，置于4℃冷藏12～24h；

三、然后將離心管于8000r/min 離心15min，收集上清液，再向離心管中補加4ml體積濃度為90％的乙醇溶液，再于 8000r/min離心5min，收集上清液，合并兩次離心獲得的上清液，并加入質量濃度為90％ 的乙醇溶液定容至10ml，得萃取液；

四、將萃取液于8000r/min離心5min，得萃取液上清液，以質量濃度為90％的乙醇溶液做參比，用分光光度計測定萃取液上清液在630nm、 647nm、664nm和750nm波長下的吸光度值，按以下公式計算水體中葉綠素a的含量： Chla＝[12.12(D664?D750)?1.58(D647?D750)?0.08(D630?D750)]Ve/V；其中Chla 為水樣中葉綠素a的含量，μg/L；D630、D647、D664和D750分別為萃取液上清液在 630nm、647nm、664nm和750nm波長下的吸光度值；Ve為萃取液的總體積，ml；V為 抽濾的水樣體積，L。

報道二、

一種棗樹冠層葉綠素a含量的檢測方法，包括以下步驟：

(1)選擇晴朗、無云或少量云層、風力小于3級的天氣采集所需測定葉綠素a含量棗 樹冠層的高光譜信息。

(2)對高光譜數據進行多元散射校正后，采用小波降噪，再進行平滑處理。

(3)提取待測定葉綠素a含量棗樹冠層的483、554、600、760、954、1153、1340、 1406nm波長的光譜反射率值。

(4)將各波長的反射率值代入棗樹冠層葉綠素a含量檢測模型：

y＝0.58939-13.23222x1+0.070986x2-9.943082x3+7.431762x4-11.9541x5- 4.926803x6+15.15402x7+5.408735x8

其中，y為棗樹冠層葉綠素a含量，單位為mg/g，x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8分別為棗樹 冠層在波段483、554、600、760、954、1153、1340、1406nm的反射率值。

主要參考資料

[1] 水利大辭典

[2] [中國發明] CN201510528132.6 一種從鈍頂螺旋藻制備高純度葉綠素a的方法

[3] [中國發明] CN201210046341.3 一種測定水中葉綠素a的方法

[4] [中國發明] CN201610361871.5 一種棗樹冠層葉綠素a含量的檢測方法