518-17-2 / 吳茱萸堿的藥理作用及制備

背景及概述^[1][2]

黃吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth，石虎Evodiarutae carpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang或疏毛吳茱萸的干燥近成熟果實，始載于《神農本草經》，距今已有上百年歷史，是一種傳統中藥，具有散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉的功效，常用于厥陽頭痛、寒病腹痛、嘔吐吞酸、五更泄瀉、高血壓等癥。吳茱萸堿是其主要生物堿成分，是色胺吲哚類生物堿。其遇濃硫酸或濃鹽酸顯橙紅色，放置轉為紅棕色，加水稀釋轉為藍色，堿化后產生污藍色沉淀。從吳茱萸果實中提取分離而得，有升高血壓作用。

藥理作用 ^[2]

1. 抗腫瘤作用

1）抑制腫瘤細胞增殖，誘導腫瘤細胞凋亡壞死

吳茱萸堿能誘導人肝癌HepG2、黑色素瘤A375-S2、宮頸癌HeLa等多種腫瘤細胞凋亡。用64、16、4、1、0.25μmol·L-1濃度的吳茱萸堿處理HepG2細胞72h的抑制率分別為74.0%、69.0%、60.5%、44.0%、16.4%。DAPI染色后吳茱萸堿組癌細胞均表現出較為典型的細胞凋亡特征。

2）抑制腫瘤細胞侵襲和轉移

在研究中發現當腫瘤細胞在含有吳茱萸堿的纖維素結合板上培養時，其擴散受到明顯抑制。相對于順鉑會嚴重減少小鼠體重，吳茱萸堿并不對實驗期間小鼠體重產生影響。因此，吳茱萸堿有望作為一種有效化合物用于治療腫瘤轉移。

2. 對心血管系統作用

吳茱萸堿（0.03μmol·L-1～1μmol·L-1）劑量依賴性增強豚鼠離體心房收縮力，加快收縮頻率，達到1μmol·L-1時能引起最大收縮。競爭性辣椒素受體（VR1）拮抗劑Capsazepine(10μmol·L-1)、非競爭性VR1拮抗劑釕紅（10μmol·L-1）和選擇性降鈣素基因相關肽（CGRP）受體拮抗劑CGRP8-37（10μmol·L-1）能取消這種作用，提示吳茱萸堿對豚鼠離體心房的興奮作用與激活VR1促進CGRP釋放有關。吳茱萸堿能防止心臟過敏性損傷。

3. 減肥、降血糖作用

吳茱萸堿干預大鼠13周后，降低肥胖大鼠體重和Lee's指數，降低肥胖大鼠內臟脂肪重量和內臟脂肪重量指數，并降低肥胖大鼠血清總膽固醇和甘油三酯含量。吳茱萸堿能逆轉肥胖并發的血管肥厚；與正常大鼠相比，肥胖大鼠胸主動脈組織和DRG中瞬態電壓感受器陽離子通道（TRPV1）表達降低，血清和腹主動脈CGRP增加。吳茱萸堿和辣椒素能增加胸主動脈組織和DRG中TRPV1的表達；吳茱萸堿能降低血清和腹主動脈中CGRP含量，其作用機制可能與調節血清、血管組織和DRG中CGRP和TRPV1的表達有關。

4. 抗炎鎮痛作用

研究吳茱萸堿是否能抑制低氧誘導的炎癥反應，結果發現吳茱萸堿能夠劑量依賴性的抑制環氧化物酶（COX-2）和一氧化氮合酶（iNOS）表達，減少前列腺素（E2）釋放。阻斷低氧誘發的AKt、70kDa核糖體蛋白S6激酶（p70S6K）和4E結合蛋白（4E-BP）磷酸化，調節低氧誘導性因子（HIF-1alpha）翻譯過程，對mRNA水平和蛋白降解率沒有影響。提示吳茱萸堿主要通過介導Akt和p70S6的去磷酸化而抑制低氧誘導的COX-2表達。吳茱萸堿顯著抑制醋酸引起的扭體次數，給予吳茱萸堿的小鼠離體回腸喪失了對感覺神經刺激的反應，保留了對迷走神經刺激的反應，吳茱萸堿通過感覺神經脫敏而發揮鎮痛作用。

制備^[3]

吳茱萸中分離吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法，具體制備方法包括以下步驟：

(1)取原料適量，加入1-50倍量的溶劑，所述溶劑為：甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯，或其混合溶劑，混合溶劑體積比控制為1：9～9：1，或甲醇、乙醇、丙酮水溶液，控制體積比為50％～95％，提取1-5次，每次1-4h，合并提取液回收溶劑得到浸膏；

(2)將步驟(1)中得到的浸膏用1-100倍量的低極性溶劑脫脂1-5次，然后再用1-100倍浸膏量的1-10％的鹽酸、硫酸、硝酸或磷酸水溶液浸泡洗滌1-48h，如此操作反復進行1-6次；

(3)將步驟(2)中得到的洗滌后的固體加入到1-100倍量的1-20％的氨水、氫氧化鈣、氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液中，充分溶解1-48h，過濾，取出殘余固體，再加鹽酸、硫酸、硝酸或磷酸水溶液反應1-48h，過濾或離心，得到固體；

(4)將步驟(3)中得到的固體用1-200倍量二氯甲烷、氯仿、丙酮或乙酸乙酯溶解，再過濾或離心，得到固液兩相，取出固液相分別用1-100倍量1-30％的氨水、氫氧化鈣、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、磷酸一氫鈉、磷酸一氫鉀、磷酸二氫鈉或磷酸二氫鉀的水溶液調節反應1-48h，液相部分經反應后，析出固體，過濾或離心，洗滌，干燥，得到吳茱萸堿粗品，固相部分經反應后，過濾或離心，洗滌，干燥，得到吳茱萸次堿粗品；

(5)將上述吳茱萸堿粗品和吳茱萸次堿粗品，用二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、異丙醇或它們的混合溶劑進行結晶和重結晶，最終得到高純度的吳茱萸堿和吳茱萸次堿晶體。

主要參考資料

[1] 化學物質辭典

[2] 吳茱萸堿的藥理學研究進展

[3] CN201810317452.0從吳茱萸中分離吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法