531-95-3/雌馬酚的藥理研究

背景及概述^[1][3]

近年來，大豆異黃酮(soybeanisoflavones，SI)生物學作用引起高度重視。研究發現，以大豆素(daidzein，Dai)和染科木黃酮(genistein，Gen)為主要成分的大豆異黃酮，具有非常廣泛的生物學特性，如雌激素樣作用、抗氧化、調節細胞周期等，可以預防多種嚴重困擾人類健康的疾病，包括骨質疏松癥、阿爾茲海默病(AD)、動脈硬化，以及乳腺癌、前列腺癌等。雌馬酚具有更高的抗氧化活性和內質網親和力。已有文獻表明，雌馬酚通過抑制內質網應激，緩解載脂蛋白 E 缺陷小鼠的動脈粥樣硬化。

制備^[1]

1)化合物(B)的制備

于洗凈干燥的1000ml反應瓶中投入50g(0.1968mol)大豆苷元、300g1，2- 二氯乙烷、95g(0.9314mol)醋酐以及12g濃硫酸。投畢，升溫至60℃反應4h， 反應完畢，減壓回收1，2-二氯乙烷，回收完畢，將剩余物反加至冰水混合液中， 析出大量結晶，過濾，干燥，得類白色固體55g。即為化合物(B)。收率：82.66％ (以化合物A計算)。熔點：187.2-187.4℃，ESI(M/Z)：338.

2)化合物(C)的制備

于洗凈干燥的500ml高壓釜中投入6g5％Pd/C、200gN，N-二甲基甲酰胺， 2g(0.0196mol)醋酐以及20g(0.0592mol)化合物(B)，投畢，密封高壓釜， 開動攪拌，經氮氣換氣后，充H2至10-20atm，于25℃，25atmH2壓力下攪拌 反應8h。反應完畢，緩慢放出殘余H2，將釜內物料過濾，濾液減壓蒸出N，N- 二甲基甲酰胺，剩余物中加入200g蒸餾水攪拌，析出結晶，過濾，干燥得白 色固體料15g。即為化合物(C)。收率：74.12％(以化合物B計算)。熔點： 152.6-154.4℃，ESI(M/Z)：342.

3)化合物(D)的制備

于洗凈干燥的1000ml反應瓶中，投入438.5g甲醇、14g(0.1707mol)無水 乙酸鈉、50g(0.1462mol)化合物(C)。投畢，升溫至62℃回流反應3h，反應 完畢，常壓回收甲醇，回收完畢，向反應瓶中加入100g蒸餾水攪拌，析出大量 結晶，過濾，干燥，得白色固體料28g。即為化合物(D)。收率：79.80％(以 化合物C計算)。熔點：205.9-206.2℃，ESI(M/Z)：240.

4)化合物(E)的制備

于洗凈干燥的500ml高壓釜中投入4.4g5％Pd/C、224g甲醇、56g二氯甲烷 和28g(0.1167mol)化合物(D)。投畢，密封高壓釜，開動攪拌，經氮氣換氣后， 充H2壓力值15atm，于20℃反應10h，反應完畢，緩慢放出殘余H2，釜內物料 過濾，濾液回收溶劑，剩余物中加入適量蒸餾水，析出大量結晶，過濾，干燥， 得白色固體料20g。即為化合物(E)。收率：70.84％(以化合物D計算)。熔點： 155.0-156.1℃，ESI(M/Z)：242.

藥理研究^[2-3]

楊志平等人體外研究了雌馬酚和順鉑聯合作用對人胃癌細胞增殖和細胞凋亡的影響及其作用機制。方法：不同濃度的雌馬酚和順鉑單獨或聯合作用于人胃癌MGC-803細胞。MTS法檢測細胞存活率;AnnexinV/PI雙染流式細胞術檢測細胞凋亡;Western blotting法檢測P-gp蛋白的表達。結果：雌馬酚與順鉑聯合作用組相對于順鉑單獨處理組顯示更強的抗增殖和促凋亡作用，并且二者聯合具有協同抗腫瘤作用。雌馬酚能夠抑制順鉑引起的P-gp蛋白的增高。結論：雌馬酚聯合順鉑能夠協同抑制人胃癌細胞的增殖和促進細胞凋亡，這可能與其抑制P-gp蛋白的表達有關。該研究為改善胃癌細胞對順鉑的敏感性提供新的治療思路，并需更進一步的研究。

白跳等人探討了雌馬酚對糖尿病心肌病大鼠心肌內質網應激和細胞凋亡的影響。方法： 24只8周齡雄性Wistar大鼠隨機分為對照組，糖尿病組和雌馬酚組，每組8只。對照組喂以普通飼料，糖尿病組和雌馬酚組大鼠喂以高糖高脂飼料。飼養第56天(第8周)，糖尿病組及雌馬酚組大鼠分別腹腔注射鏈尿佐菌素45 mg/kg一次，制備糖尿病模型。此后，雌馬酚組大鼠改為食用含0.1%雌馬酚的高糖高脂飼料，糖尿病組和對照組大鼠繼續飼喂原方案飼料。鏈尿佐菌素注射后第12周，測定體質量、血清甘油三酯和總膽固醇水平及空腹血糖，用Western blot蛋白檢測法測定心肌GRP78、CHOP、ATF-6、活化caspase-3、Bax及Bcl-2表達水平。

結果與對照組比較，糖尿病組大鼠體質量顯著下降，血清總膽固醇、空腹血糖水平明顯升高(P<0.05)，血漿LDH、CK-MB、AST水平增高(P<0.05)，心肌內質網應激相關指標GRP78、CHOP、ATF-6顯著升高(P<0.05)，且活化caspase-3蛋白和促凋亡蛋白Bax顯著增高，抗凋亡蛋白Bcl-2減少(P<0.05)。與糖尿病組比較，雌馬酚組大鼠體質量增加，血清總膽固醇、空腹血糖水平明顯降低(P<0.05)，血漿心肌酶LDH、CK-MB、AST水平減少(P<0.05)，心肌內質網應激相關指標GRP78、CHOP、ATF-6顯著減少(P<0.05)，且活化caspase-3蛋白和促凋亡蛋白Bax表達減少，抗凋亡蛋白Bcl-2表達增多(P<0.05)。結論：雌馬酚可減輕糖尿病大鼠心肌內質網應激及細胞凋亡。

主要參考資料

[1] CN201410810612.7 一種雌馬酚的合成方法

[2] 楊志平，李駿，姚亞紅，楊雪帆.雌馬酚通過抑制P-gp蛋白增強順鉑抗胃癌細胞增殖[J].營養學報，2019，41(01):81-84.

[3] 白跳，遲麗屹，高宇勤，胡小菁.雌馬酚對糖尿病大鼠心肌內質網應激和細胞凋亡的影響[J].山西醫科大學學報，2018，49(08):886-889.