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57-13-6/尿素的幾種檢測方法

背景及概述[3]

尿素別名碳酰二胺、碳酰胺、脲 。是由碳、氮、氧和氫組成的有機化合物,又稱脲(與尿同音)。其化學公式為 CON2H4、(NH2)2CO 或 CN2H4O,國際非專利藥品名稱為 Carbamide。外觀是白色晶體或粉末。它是動物蛋白質代謝后的產物,通常用作植物的氮肥。尿素在肝合成,是哺乳類動物排出的體內含氮代謝物。這代謝過程稱為尿素循環。尿素是第一種以人工合成無機物質而得到的有機化合物。

尿素的幾種檢測方法

檢測方法[1-2]

報道一、

一種尿素濃度檢測方法,包括:

S1:制備標準溶液,利用購買的尿素溶液或固體尿素配制一定濃度梯度的尿素標準溶液;

S2:配制顯色劑,所述顯色劑為含有一定濃度二乙酰一肟和硫代氨基脲的溶液;硫代氨基脲的加入,能夠使產物顏色穩定、不易褪色,從而保證了測量精度,擴大了線性動態范圍,從而解決了現有的尿素濃度檢測方法顯色時間短、只能在實現室使用的缺陷;

S3:配制酸試劑,利用硫酸和磷酸配制酸試劑,磷酸和硫酸提供給溶液一定的緩沖區間,能夠緩沖溶液酸堿度的變化;

S4:測量不同濃度尿素標準溶液的吸光度,制備標準曲線;

S5:將欲測量的尿素溶液與顯色劑和酸試劑混合反應,測量產物的吸光度,代入標準曲線中,計算出尿素濃度。

較優的,所述步驟S1中,尿素標準溶液的溶劑為去離子水,濃度介于1-5mg/L。

具體的,例如可通過下述步驟配備標準溶液:

S11:在1L容量瓶中溶解0.1000g尿素于約800mL去離子水,加入0.1mL氯仿,加水定容稀釋至刻度,得到100ug/mL的母液;

S12:稀釋母液得到各濃度梯度的標液。

本方法中,所配制的標準溶液,既可以用于后期制備標準曲線,也可以用于儀器的自動校準。

較優的,所述顯色劑中,溶劑為去離子水,二乙酰一肟的濃度介于10g/L-20g/L,硫代氨基脲的濃度介于0.1g/L-0.2g/L。

具體的,例如可通過下述步驟配備顯色劑:

S21:配制二乙酰一肟溶液:稱取34.44g二乙酰一肟溶于800mL去離子水中,定容至1000mL,混勻后保存于棕色瓶,避光陰涼保存;

S22:配制硫代氨基脲溶液:稱取0.344g硫代氨基脲溶于1000mL去離子水中,混勻后保存于棕色瓶中;

S23:在500mL棕色瓶中,分別加入250mL二乙酰一肟和250mL硫代氨基脲溶液,混勻;有條件的,可以用140kpa高純氦氣脫氣1分鐘。顯色劑一般有效期20d左右。

較優的,所述酸試劑中,溶劑為去離子水,硫酸的濃度介于500g/L-700g/L,磷酸的濃度介于150g/L-250g/L,且酸試劑中含有濃度介于0.03g/L-0.06g/L的氯化鐵,氯化鐵給溶液提供的三價鐵離子能夠避免反應產生的羥胺干擾。

具體的,例如可通過下述步驟配備酸試劑:

S31:在1L燒杯中,緩緩加入327mL硫酸于約500mL去離子水中;

S32:再加入128mL的85%磷酸于硫酸-水溶液中;

S33:再加入0.055g氯化鐵,用去離子水定容至1000mL。

報道二、

一種乳中尿素定性檢測方法,包括如下所述的步驟。

a.配制濃度為20mg/ml尿素酶溶液,以及使用乙醇配制得到質量含量為0.5%溴百里香酚藍乙醇溶液。例如在一種示意性實施方式中,稱取20mg尿素酶,加入1ml三級水,制成20mg/ml尿素酶溶液;稱取0.5g溴百里香酚藍,加入100ml乙醇,制成質量含量約為0.5%溴百里香酚藍乙醇溶液。

b.使用奶粉和純水配制復原乳,其中所述奶粉和所述純水的質量比為1:7,使用現有的方法準確測量復原乳的尿素含量,以確保所述復原乳中尿素含量在正常范圍內。例如在一種示意性實施方式中,稱取1g奶粉加入7ml三級水,渦旋混勻,制成復原乳,用酶解法檢測其中的尿素含量為0.25g/L。本領域技術人員可以理解,正常的牛乳中也含有尿素,尿素的含量一般在0.21~0.34g/L的范圍內(J.S. jonker, R.A. Kohn, R.A. Erdman, Using mile urea nitrogen to predict nitrogen excretion and utilization efficiency in lactating dairy cows, Journal of Dairy Science, 1998,81(10):2682?2692)。

c.配制尿素溶液,向復原乳中添加制得的尿素溶液,使得復原乳中的尿素濃度增加0.2g/L,得到陽性對照乳。例如在一種示意性實施方式中,稱取0.1g尿素,加入10ml三級水,制成10g/L尿素溶液;吸取980uL復原乳,加入20uL的10g/L尿素溶液,混勻,使得復原乳中尿素濃度增加0.2g/L,即得到尿素含量為0.45g/L陽性對照乳。當然也可以配制其他濃度的尿素溶液,只要改變加入尿素溶液的量,保證復原乳中尿素的濃度增加0.2g/L即可。

d.各取1mL待測乳和陽性對照乳,離心處理后分別取上層清液,均加入40uL尿素酶溶液和20uL溴百里香酚藍乙醇溶液,渦旋混勻后分別得到待測乳清液和陽性對照乳清液。例如在一種示意性實施方式中,各量取1ml待測乳和陽性對照乳,以10000rpm高速離心20min;分別取離心后的上清液,然后均加入40uL尿素酶溶液和20uL溴百里香酚藍溶液,渦旋5s混勻,得到待測乳清液和陽性對照乳清液。

e.將待測乳清液和陽性對照乳清液靜止1min,并按照如下方法定性判斷待測乳清液中的尿素含量。

ea.若待測乳清的顏色比陽性對照乳清液的顏色淺,則說明待測乳中的尿素含量小于陽性對照乳中的尿素含量。例如在一種示意性實施方式中,陽性對照乳清液為藍色,待測乳清為黃綠色,說明待測乳中的尿素含量小于陽性對照乳中0.45g/L的尿素含量。

eb. 若待測乳清的顏色比陽性對照乳清液的顏色深或顏色一致,則說明待測乳中的尿素含量大于或等于陽性對照乳中的尿素含量。

參考文獻

[1][中國發明]CN201610643294.9尿素濃度檢測方法及尿素濃度在線監測設備

[2] [中國發明] CN201010597413.4 一種乳中尿素定性檢測方法

[3] A+醫學百科

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