571186-92-0 / 伊馬替尼雜質F的高靈敏度分析方法

概述^[1]

伊馬替尼雜質F中文別名：伊馬替尼(吡啶)-N-氧化物，英文別名CGP 72383；伊馬替尼雜質F存在于甲磺酸伊馬替尼片的生產過程，甲磺酸伊馬替尼片中雜質F的測定液相色譜質譜法。甲磺酸伊馬替尼片；化學名稱；4-[(4-甲基-1-哌嗪)甲基]-N-[4-甲基-3-[[4-3-吡啶-2-嘧啶]氨基]苯基] -苯胺甲磺酸鹽，適應癥為治療費城染色體陽性的慢性髓性白血病(Ph+CML)的慢性期，加速期或急變期，用于治療不能切除或發生轉移的惡性胃腸道間質腫瘤(GIST)的成人患者，在該藥合成過程中，會產生基因雜質F，按照EP規定采用LCMS對某制藥公司提供的樣品進行了分析測定，對相關藥物分析研發人員有一定的參考意義，利用液相色譜質譜儀檢測甲磺酸伊馬替尼片中雜質F的含量，分析與驗證該方法的可行性，使其達到藥典規定的要求。兩者結構式如下：

高靈敏度分析方法^[1]

針對伊馬替尼雜質F，開發一種分析方法，采用高效液相色譜-質譜聯合使用的方法，用有機溶劑和水的混合相溶解樣品，然后再以乙腈和pH=3.5的甲酸銨作為流動相，在十八烷基鍵合硅膠色譜柱上進行梯度洗脫，這個方法簡單有效地解決了雜質F檢測靈敏度不高，專屬性不強，更高效的分離并檢測出伊馬替尼雜質F。

本技術的具體方案如下所示：

（1）采用高效液相色譜-質譜法連用，以0.01%-0.05%甲酸乙腈溶液和甲酸銨緩沖液作為流動相，在十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱上進行梯度洗脫。

（2）溶解樣品所用的稀釋液，乙腈和水的比例是20:80；

（3）所選用的甲酸銨緩沖鹽的pH值為3-4，優選的pH值為3.4-3.5；

（4）甲酸銨的濃度范圍為0.6g/l-1.2g/l；

（5）色譜的檢測條件為：流動相洗脫速率為0.8-1.2ml/min;色譜柱的溫度為30℃-40℃；

（6）樣品進樣量為10ul。

本分析方法的效果和優點是：

（1）可以非常有效地分離出甲磺酸伊馬替尼與伊馬替尼雜質F，空白稀釋液不會干擾雜質F的檢測，該分析方法專屬性很強，而且比較快速；

（2）該分析方法相對而言操作比較簡單；

（3）該分析方法能夠對甲磺酸伊馬替尼與伊馬替尼雜質F進行定量，而且還具有很高的靈敏度，檢測限位0.02ppm、定量限位0.05ppm。

伊馬替尼雜質F歐洲藥典要求^[1]

化合物N-（5-氨基-2-甲基苯基）-4-（3-吡啶基）-2-嘧啶胺是合成甲磺酸伊馬替尼的中間體，屬于潛在的基因毒性雜質。在歐洲藥典（EP8.4）甲磺酸伊馬替尼原料藥質量標準中，將化合物N-（5-氨基-2-甲基苯基）-4-（3-吡啶基）-2-嘧啶胺命名為伊馬替尼雜質F，并且規定其限度不得超過20ppm，并公開了用高效液相色譜-質譜聯用的檢測伊馬替尼雜質F的方法，按照歐洲藥典（EP8.4）的公開的實驗條件，來配制不同濃度的伊馬替尼雜質F的對照品，檢測限以S/N≥3計，定量限以S/N≥10計，確定該方法伊馬替尼雜質F的檢測限為0.1ppm、定量限為0.25ppm。

LC-MS測定甲磺酸伊馬替尼中基因毒性雜質的含量^[2]

建立LC-MS法來測定甲磺酸伊馬替尼中基因毒性雜質的含量。其具體的實驗方法為：采用Inertsil ODS-3 C18色譜柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流動相A為10 mmol.L-1甲酸銨溶液（用甲酸調pH至3.2）,流動相B為甲醇,然后再梯度洗脫（0～10 min,45%B;10～17 min,45%→80%B;17～22 min,80%B;22～23 min,80%→45%B;23～33 min,45%B）;流速為1.0 mL.min-1;柱溫為35℃;采用正離子模式采集數據。結果：雜質507-00進樣是在0.018～0.734 ng范圍內,與峰面積呈良好線性關系,線性方程為Y=8.909×104X-453.2,r=0.9999;檢測限0.007 ng;定量限為0.018 ng;平均回收率為90.9%,RSD為3.6%（n=9）。最終結論為本方法簡便準確,可用于甲磺酸伊馬替尼中基因毒性雜質的檢測。

參考文獻

[1]江蘇豪森藥業集團有限公司.伊馬替尼基因雜質的高靈敏度分析方法:中國,CN201610139151.4[P].2016-07-20.

[2] 劉俊華, 鐘雅妮, 熊淵, et al. LC-MS測定甲磺酸伊馬替尼中基因毒性雜質的含量[J]. 藥物分析雜志, 2013(7):1168-1170.