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7241-98-7/黃曲霉毒素G2的檢測方法

背景及概述[1][3]

黃曲霉毒素G2是霉菌的次生代謝物,存在于發霉的大豆、豆油、棉籽油、谷物等中?,F已分離出有黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2六個化合物。對多數動物具有強烈毒性,可引起某些動物肝臟致癌,其中以黃曲霉毒素B1毒性最高。它們在紫外光照射下呈強烈的熒光。

黃曲霉毒素G2的檢測方法

黃曲霉毒素(Aflatoxins,AF)是黃曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(A.parasiticus)和模式曲霉(A.nomius)等在合適的溫度和濕度條件下產生的真菌毒素,對人畜有強烈的致病性、致癌性,嚴重危害人體健康,是危害最嚴重的真菌毒素。污染糧食的黃曲霉毒素主要有 B1、B2、G1和G2。目前AF 的檢測方法主要有薄層色譜法、膠體金試紙條法、 酶聯免疫法、液相色譜法或液質聯用法等方法。

檢測方法[2] [3]

方法一:選擇MycosepTM226 MFC 多功能柱或相當者結合高效液相色譜熒光檢測器-柱后衍生測定啤酒,玉米、花生及其制品中黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2,方法準確度高、靈敏度好,步驟簡單,操作方便,適合在基層實驗室推廣。

1、方法如下:

1.1 標準液的配制

準確吸取適量的黃曲霉毒素標準儲備液,用乙腈溶液稀釋成混合標準工作溶液,濃度 100 ng/mL -20 ℃ 避光保存。準確吸取工作溶液 10 μL、30 μL、50 μL、 70 μL、100 μL、200 μL 在1.5 mL 樣品瓶中,用乙腈—水(20+80)定容至 1.0 mL。其中黃曲霉毒素 B1、 B2、G1、G2 分別為1.0、 3.0、5.0、7.0、10.0、20.0 ng/mL。臨用前配制。

1.2 樣品前處理

1.2.1 啤酒樣品

啤酒樣品倒入燒杯中超聲 10min,除去二氧化碳氣體。準確稱取試樣 5.00 g 于50 mL 離心管中,加入乙腈—水(20+80)至 20.0 mL,渦旋 3 min,8 000 r/min 離心 5 min 取上清液備用。

1.2.2 植物油脂

準確稱取樣品 5.00 g 于50 mL離心管中,加入20.0 mL乙腈—水(20+80),渦旋3min,8 000 r/min 離心5 min 取上清液備用。

1.2.3 固體樣品

準確稱取經過磨細(粒度小于2 mm)的試樣 5.00 g 于50 mL 離心管中,加入 20.0mL 乙腈—水(20+80),渦旋 3 min,8 000 r/min 離心5 min 取上清液備用。

1.3 試樣凈化

移取 8.00 mL 提取液至多功能凈化柱的玻璃管內,將多功能凈化柱的填料管插入玻璃管內并緩慢推動填料管,凈化液就被收集到凈化柱的收集池內。取 5 mL 凈化液在 30 ℃下用氮氣緩緩吹至近干,用乙腈—水(20+80)定容至 1.00 mL,渦旋 30 s,過 0.22 μm 濾膜,收集濾液于進樣瓶中,上機測定。

1.4 高效液相色譜條件

色譜柱色譜柱inertsustain C18 柱(填料直徑5μm內徑 4.6 mm 柱長 250 mm)柱溫:40℃ 熒光檢測器 激發波長:360nm發射波長:440 nm流動相:水+甲醇+乙腈:68+16+16 進樣量:20 μL 流速:1.0 mL/min柱后衍生系統衍生液 0.05 %碘溶液 流速 0.5 mL/min 反應管溫度:70 ℃

2、結果

2.1 四種黃曲霉毒素色譜圖 由圖可以看出,黃曲霉毒素 G1、G2、B1、B2 在 1.2.4 色譜條件下分離效果良好、沒有其它干擾峰。

2.2 線性與檢出限 分別吸取一定量的標準溶液,用乙腈—水(20+80)配置成一系列標準混合溶液,在0.1 ng/mL—50.0 ng/mL 之間,在1. 4 色譜條件下,以峰面積對濃度作線性回歸分析。結果見表 1。根據3 倍信噪比(3S/N)結合檢測方法計算出檢出限。由表 1 可以看出黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2 線性關系良好,檢出限能夠達到國家標準 GB2761-2011 《食品中真菌毒素限量》 的要求。

2.3 精密度與回收率

用本法在已知濃度的同一樣品 5.00 g 中加入黃曲霉毒素 G1、G2、B1、B2 混標 10 ng,重復 6 次測定,計算實測含量,測定結果見表 2。由表 2 可知,黃曲霉毒素 G1、 G2、 B1、 B2 各相對標準偏差在 3.87 %~5.00 % 之間,回收率達到 85 %~94 %。說明該方法準確度較好,精密度良好,符合分析要求。

黃曲霉毒素G2的檢測方法

方法二:

趙群等建立了一種使用超高效液相色譜儀LC- 30A測定糧食中黃曲霉毒素的方法。 結果表明,該方法線性良好,相關系數均大于0.9999;進樣量2μL,儀器檢出限為0.002~0.019μg/L,儀器定量限為0.007~0.065μg/L;玉米樣品加標回收率在 93.9%~104.4%。本方法同普通液相色譜相比具有無需衍生,節約流動相和時間,操作簡單,準確度和靈敏度高等優點。適用于糧食中黃曲霉毒素的快速、準確檢測。

主要參考資料

[1] 化學詞典

[2]王志強.高效液相色譜-柱后衍生法測定食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2[J/OL].河南預防醫學雜志,2018(11):828-831[2018-10-25].https://doi.org/10.13515/j.cnki.hnjpm.1006-8414.2018.11.010.

[3]趙群,徐振斌.超高效液相色譜快速測定糧食中黃曲霉毒素含量[J].糧食科技與經濟,2017,42(03):43-45.

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