9001-60-9 / L-乳酸脫氫酶的制備

概述^[1]

L-乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶,存在于機(jī)體所有組織細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，其中以腎臟含量較高。L-乳酸脫氫酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶，幾乎存在于所有組織中。在動物或微生物體中，乳酸脫氫酶(簡稱“LDH”)是以NADH為輔酶，將丙酮酸經(jīng)過生化反應(yīng)生成乳酸，因此乳酸脫氫酶是乳酸菌發(fā)酵的關(guān)鍵酶。自然界中存在L和D兩種依賴NADH的乳酸脫氫酶，分別催化丙酮酸生成L-乳酸和D-乳酸。在同時(shí)具有D-乳酸脫氫酶和L-乳酸脫氫酶的乳酸菌中，如果將D-乳酸脫氫酶缺失，就可以得到理論上光學(xué)純度為100％的L-乳酸。L-乳酸脫氫酶廣泛存在于微生物中，但目前只有少數(shù)乳桿菌屬的L-乳酸脫氫酶基因被克隆和測序。

L-乳酸脫氫酶偏高的原因^[3]

至于L-乳酸脫氫酶高的原因，有以下方面:

1.當(dāng)乙肝病毒攜帶者病情惡化成乙肝患者時(shí)，部分肝細(xì)胞受損，血清中L-乳酸脫氫酶4和L-乳酸脫氫酶5含量就會有不同程度的增高。

2.乙肝治療方法特別是是用藥不當(dāng)，長期服用同一種藥物時(shí)造成腎毒現(xiàn)象的產(chǎn)生。當(dāng)腎毒現(xiàn)象出現(xiàn)時(shí)，血清中L-乳酸脫氫酶含量會迅速升高。

3.乙肝不進(jìn)行合適積極的治療，發(fā)展到一定程度時(shí)會造成肝臟代謝嚴(yán)重異常，導(dǎo)致腎臟功能衰竭，從而也會引起L-乳酸脫氫酶含量升高。

4.肺梗塞、惡性貧血、休克及腫瘤轉(zhuǎn)移所致的胸腹水時(shí)，會引起L-乳酸脫氫酶的偏高。

偏低的原因

L-乳酸脫氫酶存在于機(jī)體所有組織細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，其中以腎臟含量較高。血清L-乳酸脫氫酶正常范圍是100~300U/L，當(dāng)出現(xiàn)乳酸脫氫酶偏低時(shí)，常見原因如下。

L-乳酸脫氫酶偏低的原因1:檢查過程中出現(xiàn)誤差;

L-乳酸脫氫酶偏低的原因2:內(nèi)分泌失調(diào);

L-乳酸脫氫酶偏低的原因3:過于勞累、睡眠不好、心情不好等。

總之，L-乳酸脫氫酶偏低一般不是很嚴(yán)重，經(jīng)過調(diào)理即可恢復(fù)。但如果出現(xiàn)乳酸脫氫酶偏高就要引起重視了。因?yàn)榉喂Ｈ盒载氀⑿菘思澳[瘤轉(zhuǎn)移所致的胸腹水時(shí)，會引起乳酸脫氫酶的偏高。

制備^[2]

于1mL離心管中加入300μL菌懸液(30mg濕菌體)和250μL磷酸鈉緩沖液(pH7.0)，37℃保溫5min，再依次加入50μL葡萄糖(終濃度50mmol/L)和400μL苯丙酮酸(終濃度10mmol/L)，反應(yīng)1h后，取200μL反應(yīng)液加入800μL甲醇終止反應(yīng)，過0.22μm有機(jī)濾膜，進(jìn)行HPLC分析；另取200μL反應(yīng)液，用1mL乙酸乙酯進(jìn)行萃取，上層有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后過0.22μm有機(jī)濾膜，進(jìn)行對映選擇性分析。結(jié)果顯示，當(dāng)體系反應(yīng)40min后，L-PLA的濃度為5.62mmol/L，產(chǎn)率為56.2％，eep>99％，當(dāng)反應(yīng)80min后，苯丙酮酸完全被消耗，產(chǎn)生8.59mmol/L的L-乳酸脫氫酶，產(chǎn)率為85.9％，eep>99％。

主要參考資料

[1] 黃彥, 韋宇拓, 張黎, 陳發(fā)忠, & 黃日波. . 乳酸片球菌l-乳酸脫氫酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá). 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)(1), 70-73.

[2] 黃彥, 韋宇拓, 張黎, 陳發(fā)忠, & 黃日波. . 乳酸片球菌l-乳酸脫氫酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá). 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)(1), 70-73.

[3] 楊壽鈞, & 蔡妙英. . 嗜熱菌的耐熱l—乳酸脫氫酶的研究. 微生物學(xué)報(bào), 031(6), 438-442.