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小鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞)

品牌:紀寧生物

貨號:JN25499

規格: 5×10?Cells

聯系方式:021-54721350

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產品詳情

小鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞)
基本信息
產品名稱 :小鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞) 
產品品牌 :紀寧生物
組織來源 :骨髓
產品規格 :5×105cells/T25細胞培養瓶

細胞簡介  

小鼠骨髓樹突狀細胞分離自骨髓。骨髓是機體的造血組織,位于身體的許多骨骼內。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等。某些淋巴細胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨) 的骨髓腔和扁平骨(如髂骨) 的稀松骨質間的網眼中,是一種海綿狀的組織,能產生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的。


樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,在G M -C SF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細胞大而形態不規則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內細胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強的遷移能力,伴隨有部分未完全誘導成的單核細胞,貼壁形態多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經T N Fα、LPS等誘導而成,多數呈懸浮生長,細胞呈圓形,細胞體積進一步增大,表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ) ,伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養也可能導致自發分化成熟。

DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,主要通過形態學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(M H C ) 以及C D 80、C D 86等共刺激分子,進而激 活T淋巴細胞,誘導免疫應答,處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環節。未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產生免疫應答,不能激活T細胞的第二信號,可導致T細胞無能,從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面C D 80、C D 86、M H C -Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,一般在30% 以下。


方法簡介

紀寧生物實驗室分離的小鼠骨髓未成熟DC細胞采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞、培養過程添加細胞因子誘導而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。

質量檢測

紀寧生物實驗室分離的小鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞) 經C D 86免疫熒光鑒定、 細胞 形態等綜合鑒定,純度可達80% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息

培 養 基 :含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :半貼半懸浮
細胞形態 :圓形、梭形、多角形,形態多樣
傳代特性 :屬于高度分化細胞。屬于不增殖細胞群
傳代比例 :不傳代
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養條件 :氣相:空氣,95% 。C O2,5%
小鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞) 體外培養周期有限。建議使用紀寧生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的最佳培養狀態。

細胞培養狀態

發貨時發送細胞電子版照片

使用方法

小鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞) 是一種半貼半懸浮細胞,細胞形態呈圓形、梭 形、多角形,形態多樣,在紀寧生物技術部標準操作流程下,細胞屬于高度分化細胞。屬于不增殖細胞群。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作

1. 取出T 25細胞培養瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。
2. 半貼壁半懸浮細胞處理
1) 收集T25細胞培養瓶中的培養基至50ml離心管中,用吸管吸取PBS,吹洗細胞培養瓶1-2次,收集清洗液。經1200-1500rpm 離心3min,棄上清,收集細胞沉淀①。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,收集細胞懸液至離心管中。經1200-1500rpm 離心3min,棄上清,收集細胞沉淀②。
4) 吸取5ml新鮮完全培養基,重懸細胞沉淀①、細胞沉淀②,把①、②混勻。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞,按實驗需求接種于實驗器皿內,然后補充適量新鮮的
完全培養基,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
6) 待細胞狀態穩定后,用于實驗??梢悦?-3天換液一次新鮮的完全培養基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

小鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞) 
注意事項

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和紀寧生物技術部溝通。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們紀寧系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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