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小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞

品牌:紀(jì)寧生物

貨號(hào):JN25593

規(guī)格: 5×10?Cells

聯(lián)系方式:021-54721350

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產(chǎn)品詳情

小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞
基本信息
產(chǎn)品名稱 :小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 :紀(jì)寧生物
組織來源 :視網(wǎng)膜組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

細(xì)胞簡(jiǎn)介

小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織。視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,兩層間在病理情況下可分開,稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,由色素上皮細(xì)胞組成,它們具有支持和營(yíng)養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,由外向內(nèi)分別為:色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。


視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,有感光作用。后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)神經(jīng)元組成。第一神經(jīng)元是視細(xì)胞層,專司感光,它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上,而視錐細(xì)胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞,約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系,負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層,專管傳導(dǎo)。

視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),它貼于眼球的后壁部,傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區(qū),其分辨能力最強(qiáng)。


方法簡(jiǎn)介

紀(jì)寧生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞采用胰蛋白酶消化法結(jié)合專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

紀(jì)寧生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞經(jīng)N estin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息

培 養(yǎng) 基 :含B-27 Supplem ent、EG F、bFG F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 :半貼半懸浮
細(xì)胞形態(tài) :圓形
傳代特性 :可傳1-2代
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用紀(jì)寧生物配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片


使用方法

小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞是一種半貼半懸浮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈圓形,在紀(jì)寧生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞可傳1-2代。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作

1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 半貼壁半懸浮細(xì)胞處理
1) 收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中,用吸管吸取PBS,吹洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液。經(jīng)1200-1500rpm 離心3min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀①。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,收集細(xì)胞懸液至離心管中。經(jīng)1200-1500rpm 離心3min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀②。
4) 吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基,重懸細(xì)胞沉淀①、細(xì)胞沉淀②,把①、②混勻。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞,按實(shí)驗(yàn)需求接種于實(shí)驗(yàn)器皿內(nèi),然后補(bǔ)充適量新鮮的
完全培養(yǎng)基,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,用于實(shí)驗(yàn)。可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞
注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和紀(jì)寧生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們紀(jì)寧系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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