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小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞

品牌:紀寧生物

貨號:JN25646

規(guī)格: 5×10?Cells

聯(lián)系方式:021-54721350

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產(chǎn)品詳情

小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞
基本信息
產(chǎn)品名稱 :小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞
產(chǎn)品品牌 :紀寧生物
組織來源 :椎間盤組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

細胞簡介  

小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞分離自椎間盤組織。椎間盤是位于脊柱兩椎體之間,由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板,是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上,下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成,位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,使纖維環(huán)成為堅實的組織,能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負荷。

纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚,而后側(cè)較薄。纖維環(huán)的前部有強大的前縱韌帶,后側(cè)的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環(huán)細胞密度為9000個細胞/m m 3,其外層的細胞呈梭型,主要屬于纖維細胞,內(nèi)層細胞呈圓形,主要屬于軟骨細胞。在培養(yǎng)的情況下,用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn),它們的核較圓,核仁較明顯。細胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。

細胞質(zhì)內(nèi)線粒體多,為橢圓形,有的可看到雙層單位膜,由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復(fù)合體和分泌顆粒,纖維環(huán)細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛,保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給。一但這種供給減少,纖維環(huán)的生物性能就會減弱,椎間盤開始退變。

方法簡介

紀寧生物實驗室分離的小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞采用膠原酶-中性蛋白紀寧合消化法并結(jié)合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。

質(zhì)量檢測

紀寧生物實驗室分離的小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息

培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁 
細胞形態(tài) :梭形、多角形 
傳代特性 :可傳3-5代左右
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用紀寧生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

使用方法

小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈梭形、多角形,在紀寧生物技術(shù)部標準操作流程下,細胞可傳3-5代左右。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作

1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞
注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和紀寧生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們紀寧系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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