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產品詳情

小鼠多巴胺神經元細胞
基本信息
產品名稱 :小鼠多巴胺神經元細胞
產品品牌 :紀寧生物
組織來源 :腦組織
產品規格 :5×105cells/T25細胞培養瓶

細胞簡介  

小鼠多巴胺神經元細胞分離腦組織。多巴胺神經元,即:胺能神經元,主要指含多巴胺的神經元,其細胞體主要分布在黑質、腳間核和丘腦下部等處。在這些區域多巴胺含量很高。多巴胺在機體內合成時以酪氨酸為原料。腦內的多巴胺主要是由黑質細胞來合成,這些多巴胺參與錐體外系統的活動,與軀體運動機能有密切關系。腦內多巴胺代謝失常時,可引起震顫性麻痹(帕金森震顫) 。


多巴胺(D opamine) ,是N A 的前體物質,是下丘腦和腦垂體腺中的一種關鍵神經遞質,中樞神經系統中多巴胺的濃度受精神因素的影響,神經末梢的G nR H 和多巴胺間存在著軸突聯系并相互作用,以及多巴胺有抑制G nR H 分泌的作用。中腦的神經原物質多巴胺(D opamine) ,則直接影響人們的情緒。從理論上來看,增加這種物質,就能讓人興奮,但是它會令人上癮。

多巴胺在前腦和基底神經節(BasalG anglia) 出現,基底神經節負責處理恐懼的情緒,但由于多巴胺的緣故,取代了恐懼的感覺,因此有很多人的上癮行為,都是因多巴胺而起的。


方法簡介

紀寧生物實驗室分離的小鼠多巴胺神經元細胞采用胰蛋白酶消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。

質量檢測

紀寧生物實驗室分離的小鼠多巴胺神經元細胞經T H 免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息

包被條件 :PLL(0. 1m g/ml) 
培 養 基 :含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁 
細胞形態 :神經元細胞樣
傳代特性 :屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群
傳代比例 :不傳代
消 化 液 :0. 125% 胰蛋白酶
培養條件 :氣相:空氣,95% 。C O2,5%
小鼠多巴胺神經元細胞體外培養周期有限。建議使用紀寧生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的最佳培養狀態。

細胞培養狀態

發貨時發送細胞電子版照片

使用方法

小鼠多巴胺神經元細胞是一種貼壁細胞,細胞形態呈神經元細胞樣,在紀寧生物技術部標準操作流程下,細胞屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群。建議您收到細胞后盡快進行相關
實驗。

客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作

1. 取出T 25細胞培養瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。
2. 靜置后,顯微鏡下觀察細胞狀態,拍照記錄細胞的貼壁情況,漂浮的細胞需離心收集后在離心管消化(脫落細胞處理方式) ,貼壁細胞也需消化后與脫落的細胞合并一起后重新接種。
3. 神經元細胞消化
1) 將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管,離心收集細胞(1200rpm5min) ,細胞沉淀按照下面脫落細胞處理方式處理該部分細胞。
2) 培養瓶內貼壁細胞,用PBS(37℃預熱) 清洗細胞一次,將PBS收集到步驟1的離心管中,不要直接丟棄。
3) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,放入4℃冰箱消化細胞3-5min(或者37℃溫浴1min ) 。
4) 倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養基終止消化(稀釋法終止消
化,培養基用量不低于5ml) 。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞,1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清,加入適量的完全培養基混勻(可補加1% FB S,促進貼壁) ,接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板) 。
7) 待細胞貼壁后可用于后續相關實驗。
4. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1200rpm 5min離心,保留沉淀。
2) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至離心管中,輕柔重懸沉淀,放置4℃冰箱靜置3-5min ) 。
3) 消化完向離心管內加入5ml完全培養基終止消化。
4) 經1200rpm ,離心5min,丟棄上清,用5ml完全培養基(可補加1% FBS,促進貼壁) 重懸沉淀,接種于新的培養瓶內。
5) 接種后絕對靜置24-48小時, 48小時后觀察,否則細胞容易聚團。
5. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ (2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/ml),明膠(0. 1% ),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

小鼠多巴胺神經元細胞
注意事項

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和紀寧生物技術部溝通。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們紀寧系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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