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基本信息
產(chǎn)品名稱 ：小鼠腦微血管周細胞
產(chǎn)品品牌 ：紀寧生物
組織來源 ：大腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
小鼠腦微血管周細胞分離自腦微血管。大腦分左右兩個半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì)) 覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個半球都有三個面，即外側(cè)面(約占整個皮質(zhì)面積的1/3) 、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積) 。半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積。大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。
由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。周細胞(pericyte) 又稱R ouget細胞和壁細胞，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞，可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內(nèi)皮細胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細胞進行細胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細胞的成熟過程。此外，周細胞還具有調(diào)控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點之一，所以對血管周細胞的生物學(xué)特征、標記物、細胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料。
周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細血管的血流量。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細血管直徑的雙向調(diào)控。毛細血管受損時，周細胞還可增殖，分化為內(nèi)皮細胞和成纖維細胞。
方法簡介
紀寧生物實驗室分離的小鼠腦微血管周細胞采用中性蛋白酶-膠原紀寧合消化法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
紀寧生物實驗室分離的小鼠腦微血管周細胞經(jīng)α-SM A 免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：成纖維細胞樣
傳代特性 ：可傳1-3代左右
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
小鼠腦微血管周細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用紀寧生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
小鼠腦微血管周細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣，在紀寧生物技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳1-3代左右。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm ，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min (或4℃冰箱靜置5-7min) 。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(補加1% FBS，促進貼壁) 重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱) 。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
小鼠腦微血管周細胞
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和紀寧生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們紀寧系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
