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小鼠胚胎干細(xì)胞

品牌:紀(jì)寧生物

貨號:JN25778

規(guī)格: 5×10?Cells

聯(lián)系方式:021-54721350

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產(chǎn)品詳情

小鼠胚胎干細(xì)胞
基本信息
產(chǎn)品名稱 :小鼠胚胎干細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 :紀(jì)寧生物
組織來源 :囊胚
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

細(xì)胞簡介  

小鼠胚胎干細(xì)胞分離自囊胚胚胎組織。胚胎干細(xì)胞(Em bryonic stem cell,ESC s,簡稱ES、E K 或E SC 細(xì)胞) 是早期胚胎(原腸胚期之前) 或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞,它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。無論在體外還是體內(nèi)環(huán)境,ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型。進(jìn)一步說,胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞) 是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的全能性,能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官,包括生殖細(xì)胞。


ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu),細(xì)胞核大,有一個(gè)或幾個(gè)核仁,胞核中多為常染色質(zhì),胞質(zhì)胞漿少,結(jié)構(gòu)簡單。體外培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞排列緊密,呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色,ES細(xì)胞呈棕紅色,而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限,形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清,細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣,多數(shù)呈島狀或巢狀。

小鼠ES細(xì)胞的直徑7微米~18微米,豬、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深,直徑12微米~18微米。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別,有其特定的生長特性和特定的標(biāo)志,例如堿性磷酸酶活性非常高,帶有胚胎階段特異性表面抗原( Stage- specificem bryonic antigen s,SSE A ) ,人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白T R A 1-60、T R A -1-81等標(biāo)志,這些特性和標(biāo)志均可以用于對胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定,除此之外,胚胎干細(xì)胞還可以在體外永久傳代,并保持正常核型。

在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子(Leukaemiainhibitory factor,LF) 或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層(M EF) 上培養(yǎng)時(shí),胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖,長期保持核型正常和穩(wěn)定,凍存解凍也不影響不分化的特性。另外,胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性,目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān),多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn),也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長的原因。


方法簡介

紀(jì)寧生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞采用分離囊胚組織,去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng),胰酶消化傳代純化制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

質(zhì)量檢測

紀(jì)寧生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)O ct-4免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息

包被條件 :明膠(0. 1%) 
培 養(yǎng) 基 :含LIF、BM P、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :短梭形、多角形
傳代特性 :可傳3-5代左右
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 025% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相:空氣,95% 。C O2,5%
小鼠胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用紀(jì)寧生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

使用方法

小鼠胚胎干細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈短梭形、多角形,在紀(jì)寧生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞可傳3-5代左右。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作

1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0. 025% 胰蛋白酶消化液或者專用消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

小鼠胚胎干細(xì)胞
注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和紀(jì)寧生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們紀(jì)寧系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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