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小鼠肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞

品牌:紀(jì)寧生物

貨號:JN25799

規(guī)格: 5×10?Cells

聯(lián)系方式:021-54721350

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產(chǎn)品詳情

小鼠肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞
基本信息
產(chǎn)品名稱 :小鼠肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 :紀(jì)寧生物
組織來源 :肺小動脈組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

細(xì)胞簡介  

小鼠肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺小動脈組織。肺動脈干是短而粗的動脈,自右心室的動脈圓錐起始,向左后上方斜升,先在升主動脈根部的前面,繼而至其左側(cè),至主動脈弓的下方,約在第5胸椎高度,分為左、右肺動脈。左肺動脈較短,橫行向左,經(jīng)左主支氣管前方至左肺門,分兩支進(jìn)入左肺的上、下葉。右肺動脈較長,橫行向右,經(jīng)主動脈升部和上腔靜脈的后方達(dá)右肺門,分3支進(jìn)入右肺上、中、下葉。左、右肺動脈的各分支在肺實質(zhì)內(nèi)又反復(fù)分支,與支氣管的分支伴行,最后達(dá)肺泡壁,形成稠密的毛細(xì)血管網(wǎng)。


肺動脈輸送的是含二氧化碳較多的靜脈血。在肺動脈干分叉處稍左側(cè)與主動脈弓下緣之間有一結(jié)締組織索,稱動脈韌帶。管徑在0. 3~1m m 之間,為小動脈(sm all-artery),小動脈包括粗細(xì)不等的幾級分支,也屬肌性動脈。較大的小動脈,內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜,中膜有幾層平滑肌,外膜厚度與中膜相近,一般沒有外彈性膜。口徑在1m m 以下的動脈,管壁有完整的平滑肌層及少量的彈性纖維和膠質(zhì)纖維。小動脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素,也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開關(guān)”。

典型的小動脈,其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對比其他動脈為厚,當(dāng)平滑肌在神經(jīng)支配下強力收縮時,其管腔可以完全閉塞,而使血液不能流入它所分布的毛細(xì)血管內(nèi),從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力。如果有許多小動脈同時收縮,可使血壓顯著上升。反之,當(dāng)小動脈的平滑肌舒張時,則可使大量的血液流入毛細(xì)血管,外周阻力明顯下降,血壓降低。終末小動脈(terminalarteri-ole)的口徑為20~30μm 。后小動脈(m etar-teriole),又稱毛細(xì)血管前小動脈(p recapil-lary arte riole)的口徑為12~15μm 。

管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌,在毛細(xì)血管前小動脈分支的起始部分,管壁平滑肌成分增厚,叫做毛細(xì)血管前括約肌(precapillary sphin c-ter),其收縮或舒張,可調(diào)節(jié)真毛細(xì)血管的血流量,是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開關(guān)”。支配小動脈平滑肌的交感神經(jīng)纖維,可延伸到終末小動脈和后小動脈的平滑肌細(xì)胞。在毛細(xì)血管前括約肌上交感神經(jīng)纖維特別豐富。肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布,該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡中起重要作用。


方法簡介

紀(jì)寧生物實驗室分離的小鼠肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原紀(jì)寧合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

質(zhì)量檢測

紀(jì)寧生物實驗室分離的小鼠肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)C D 31免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息

包被條件 :PLL(0. 1m g/ml),明膠(0. 1%)
培 養(yǎng) 基 :基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含F(xiàn)BS、EG F、bFG F、IG F、V EG F、H eparin、H ydrocor
tisone、P enicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 :可傳1-3代
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相:空氣,95% 。C O2,5%
小鼠肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用紀(jì)寧生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片

使用方法

小鼠肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈內(nèi)皮細(xì)胞樣,在紀(jì)寧生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞可傳1-3代。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。

客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作

1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2)添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至
5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 復(fù)蘇操作說明
1. 準(zhǔn)備好37度水浴鍋,預(yù)熱至37度。
2. 準(zhǔn)備好T25培養(yǎng)瓶,加入10ml完全培養(yǎng)基(培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積)。
3. 取出干冰內(nèi)凍存細(xì)胞管,用EP手套包裹凍存管(防止管內(nèi)進(jìn)水導(dǎo)致污染),迅速放于水
浴鍋內(nèi),于1min內(nèi)融化完全。
4. 取出凍存管,酒精噴灑消毒后擦干,置于超凈臺內(nèi)。
5. 吸取凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液,加入步驟2中準(zhǔn)備好的T25培養(yǎng)瓶內(nèi),8字緩慢搖勻。
6. 培養(yǎng)瓶放于37度C O 2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),靜置培養(yǎng)24h,更換新鮮換培養(yǎng)基(注意貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞不同換液操作方法)。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進(jìn)行包被,以增強細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

小鼠肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞
注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和紀(jì)寧生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們紀(jì)寧系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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