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陰道加德納菌PCR試劑盒

品牌:紀(jì)寧生物

貨號(hào):JN31940

規(guī)格: 50次

聯(lián)系方式:021-54721350

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產(chǎn)品詳情

陰道加德納菌PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
陰道加德納菌(Gardnerella vaginalis、 GV)最初是 1954 年 Gardner從陰道炎病人的陰道分泌物中分離出來(lái)的與非特異性陰道炎相關(guān)的致病菌。該菌除引起 BV 以外,GV 還可致早產(chǎn)、產(chǎn)褥熱、新生兒敗血癥、絨毛膜羊膜炎、產(chǎn)后敗血癥、膿毒血癥、尿路感染、腎周膿腫及膀胱炎、宮頸炎,不潔流產(chǎn),術(shù)后感染等多種疾病 ,是新認(rèn)識(shí)的一種性傳播疾病的病原菌和條件致病菌。因此快速靈敏診斷此病原菌具有重要的意義。
本試劑盒就是為此目的根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā),它具有下列特點(diǎn): 
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增陰道加德納菌,與其他病原沒(méi)有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次,但只能用于科研。
規(guī)格及成分

編號(hào)

成分

規(guī)格

試劑一

PCR MagicMix 3.0

1 mL(紅蓋)

試劑二

超純水

1 mL(亮黃色)

試劑三

陰道加德納菌 PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑四

陰道加德納菌 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 /μL)

50 μL(黃蓋)

試劑五

使用手冊(cè)

1 份

運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。
自備試劑
樣品DNA。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備:
1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個(gè)樣品,則需要做N+2個(gè)提取,包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 陰道加德納菌 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系):
3. 對(duì)N+2個(gè)樣品,在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照,故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分:

成份

N+2 個(gè)樣品管

PCR 陰性對(duì)照

PCR陽(yáng)性對(duì)照

PCR Magic Mix 3.0

20μL

20μL

20μL

陰道加德納菌PCR 引物混合液

2μL

2μL

2μL

N+2個(gè)樣品DNA模板

18μL

--

--

PCR 陰性對(duì)照(水)

--

18μL

--

PCR 陽(yáng)性對(duì)照(陰道加德納菌PCR陽(yáng)性對(duì)照1000倍稀釋液)

--

--

18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng):

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95℃

5 min

PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)

95℃

30 sec

55℃

30 sec

72℃

40 sec

最后延伸

72℃

7 min

三、電泳檢測(cè):

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。

PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增,否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

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