一、基本信息

細胞名稱

(A375/DDP)人惡性黑色素瘤細胞順鉑耐藥株

細胞編號

JN-CC2322

細胞品牌

紀寧生物

細胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

細胞來源

人

組織來源

皮膚

生長特征

貼壁生長

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

細胞代數(shù)

10代以內(nèi)

細胞貨期

現(xiàn)貨，1周左右

培 養(yǎng) 基

90% DMEM+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

供應(yīng)范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

支原體檢測

無

二、細胞培養(yǎng)操作

T25瓶－細胞操作

收貨處理

用75%酒精擦拭細胞瓶表面，放37度培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代比例

首次傳代建議1:2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。
是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-5 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
3.細胞懸液按1:2比例分到新的含8 ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項

1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。

凍存管－細胞操作

收貨處理

收到細胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇

傳代密度

第二天換液并檢查細胞密度

傳代比例

一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

傳代方法

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）第二天換液并檢查細胞密度。

注意事項

1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察
若未融化可以將細胞按正常步驟保存。

2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復蘇細胞。

凍存－細胞操作

凍存液配方

無血清凍存液，液氮儲存

細胞密度

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存，以T25瓶為例。

三、售后服務(wù)

細胞予重發(fā)

1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。

2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4.常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5.常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)。

6.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細胞不重發(fā)

1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

四、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術(shù)問題或?qū)嶒瀱栴}，都可以撥打我們的免費服務(wù)電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術(shù)中／實驗中的免費解答。