一、基本信息

細胞名稱

(NCI-H460/DDP)人大細胞肺癌順鉑耐藥株

細胞編號

JN-CC2324

細胞品牌

紀寧生物

細胞規格

1×10?cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝

細胞來源

人

生長特征

貼壁生長

細胞形態

上皮樣

細胞代數

10代以內

培 養 基

RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBSNCI-H460/cis完全培養基

重要提醒

培養瓶中的培養基是不含藥物的，待細胞狀態良好，穩定生長時，可以用含加含40nM的吉西他濱藥物培養基處理48h，期間若有部分細胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液去掉即可。凍存時請不要在培養基中加藥物。

傳代方法

1：2傳代

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

供應范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

觀察

1、收到細胞后，請及時核對培養瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養瓶是否有破損或漏液等異常情況。

處理

1、75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40x,100x,200x各一張）前三天照片為重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。

3、不要打開培養瓶蓋，將細胞放入37度培養箱中靜置3-4小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態，并按常規貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。

貼壁

未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，留5ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。首次傳代，建議1:2傳代（兩個T25）。（傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，進行對比培養。）

二、細胞培養操作

T25瓶－細胞操作

收貨處理

用75%酒精擦拭細胞瓶表面，放37度培養箱內靜置培養2-4h，以便穩定細胞狀態

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養

傳代比例

首次傳代建議1:2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。
是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次。

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min。

3、棄上清，沉淀細胞用1-2ml 完全培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，后放入37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。

注意事項

個別細胞貼壁不牢，在運輸過程中發生細胞脫落，這是正常現象。請將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清（后期對比培養使用），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加 5ml 完全培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml 完全培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，后放入 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。注意：如收到密封培養瓶，處理完后放入培養箱培養時要將培養瓶蓋子擰松。

凍存管－細胞操作

收貨處理

1. 收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發等問題，請即時聯系。

2. 將細胞取出轉移至液氮或－80度冰箱保存，建議盡早復蘇。

3、復蘇第一管如有活性狀態問題及時與我們聯系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管。特別說明：未與我方聯系擅自復蘇第二管出現問題不予售后。

傳代密度

第二天換液并檢查細胞密度

傳代比例

一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶

傳代方法

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜）第二天換液并檢查細胞密度。

注意事項

1.收貨時若發現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察
若未融化可以將細胞按正常步驟保存。

2.為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。

凍存－細胞操作

細胞凍存

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次。

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5mi。

3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml/支的富衡無血清凍存液（FH7001），混勻后加入凍存管中。如：凍一支，加入1ml無血清凍存液）

4、 將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放24小時以上。

三、售后服務

細胞予重發

1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4.常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5.常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。

6.細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不重發

1.客戶操作造成細胞污染，不重發。

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。

四、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。