一、基本信息

細胞名稱

人臍靜脈內皮原代細胞-GFP/人臍靜脈內皮原代細胞-綠色熒光蛋白標記(免疫熒光)

細胞編號

JN-CC2548

細胞品牌

紀寧生物

細胞規(guī)格

1x10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管

種屬來源

人

組織來源

臍帶組織

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

細胞簡介

內皮原代細胞細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因，并穩(wěn)定表達GFP蛋白。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2，代謝產物即代謝廢物和營養(yǎng)物質的交換。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質從胎盤運送給胎兒。

puro藥篩濃度

人臍靜脈內皮原代細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中可不用再添加puro，如若擔心抗性隨著傳代時間降低，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持。

STR位點

CSF1PO:11,12；D13S317:12,14；D16S539:9,13；D18S51:17,18；D21S11:28,30.2；D3S1358:15,16,17；VWA:16,19；D5S818:8,9；D7S820:11；Amelogenin:X；D8S1179:12,14；FGA:23；PentaD:9,10；PentaE:7,15；TH01:7,9.3；TPOX:11；

細胞代數

10代以內

生物安全等級

1

生長特性

貼壁生長

生長條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

培 養(yǎng) 基

人臍靜脈內皮原代細胞專用培養(yǎng)基

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

細胞貨期

2周左右

發(fā)貨方式

復蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用）

供應范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

二、細胞培養(yǎng)操作

Ｔ25瓶

收貨處理

觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項

1. 運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

2. 因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F象。

凍存管

收貨處理

到細胞后，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇

傳代密度

第二天換液并檢查細胞密度

傳代比例

一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

傳代方法

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）第二天換液并檢查細胞密度。

注意事項

1. 收貨時若發(fā)現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存。

2. 為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。

三、細胞凍存操作

凍存液配方

無血清凍存液，液氮儲存

細胞密度

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例

凍存方法

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案

四、售后服務

細胞予重發(fā)

1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。

2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發(fā)。

3.收到細胞3天內，發(fā)現污染問題，經核實后，重發(fā)。

4.常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發(fā)。

5.常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發(fā)。

6.細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發(fā)。

細胞不重發(fā)

1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5.細胞培養(yǎng)時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發(fā)。

6.收到細胞發(fā)現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

五、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。