英文名稱 : α-Mannosidase(α-man)Activity Assay kit
產品包裝 : 盒裝
產品規格 : 100T/48S
儲存條件 : -20℃
檢測方法 : 微量法
有 效 期 : 6個月
產品組成:
試劑名稱
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規格
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保存條件
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提取液一
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液體110mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體15mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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粉劑×2支
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-20℃保存
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試劑三
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粉劑8mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑四
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液體1.5mL×1瓶
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2-8℃保存
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標準品
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液體1mL×1支
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-20℃保存
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產品說明:
α-man 分布廣泛、種類繁多,在真核生物胞質、內質網、高爾基體、溶酶體中都有發現,不同種類、功能的 α-man 共同參與 N-聚糖的修飾過程。α-man 和特定底物發生反應,其生成物在 405nm 處有特征吸收峰,根據吸光度的變化率可計算出 α-man 活性。
注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、恒溫培養箱/水浴鍋、勻漿器/研缽、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸餾水。
注意事項:
如果測定吸光值 A>1.5 或 ΔA>1,建議稀釋樣本后再測定,計算公式中乘以稀釋倍數;如果測定吸光值 較低或接近空白 OD 值,建議增加樣本量后再進行測定。
實驗實例:
1 、稱取 0.1 g 兔子肝臟組織,加入 1 mL 提取液, 冰浴勻漿, 12000 g ,4℃條件下離心 10 min;取上清置于冰上 待測。使用 96 孔板按照測定步驟操作,計算 ΔA=A 測定管-A 對照管=0.404-0.309=0.095,標準曲線 y=1.3642x+ 0.0037,計算 x=0.0669 ,按公式計算活性:
α-甘露糖苷酶酶活(U/g 質量) = x×0.1÷W×F = 0.0669 U/g質量
2 、稱取 0.1 g 綠蘿葉片,加入 1 mL 提取液, 冰浴勻漿,12000 g ,4℃條件下離心 10 min;取上清置于冰上待測。 使用 96 孔板按照測定步驟操作,計算 ΔA=A 測定管-A 對照管=0.179-0.159=0.02,標準曲線 y=1.3642x+ 0.0037, 計算 x=0.0119 ,按公式計算活性:
α-甘露糖苷酶酶活(U/g 質量)= x×0.1÷W×F = 0.0119 U/g質量
3 、 用 0.025mL牛血清按操作步驟進行實驗,使用96孔板按照測定步驟操作,計算 ΔA=A 測定管-A 對照管=0.107- 0.086=0.021 ,標準曲線 y=1.3642x+ 0.0037,計算 x=0.0127 ,按公式計算活性:
α-甘露糖苷酶酶活(U/g 質量)= x×0.1÷W×F = 0.0127 U/mL