一、基本信息

細胞名稱

MEF小鼠胚胎成纖維細胞

細胞品牌

紀寧生物

細胞規格

1×10?cells/T25培養瓶

細胞英文

MEF

基本形態

成纖維細胞樣

傳代方法

1 : 2傳代

生長特性

貼壁生長

消化時間

2-3分鐘

凍存條件

無血清細胞凍存液

完全培養基

DMEM(高糖)+10%FBS  MEF完全培養基  

培養環境

37℃，5%CO2，95%AIR

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2,5% ；溫度：37℃

供應范圍

僅供科研使用

特征特性

取孕9天的615小鼠胚胎，去除腦、心臟等培養建立，該細胞可用作飼養層細胞，支持胚胎干細胞ES的生長并維持ES未分化的狀態，當作為飼養層細胞時，MEF需經絲裂霉素C處理停止生長，建議作為ES細胞的飼養層時，MEF不要超過6代。

二、細胞培養操作

到貨處理

1、收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發等問題，請即時聯系。

2、將細胞取出轉移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復蘇。

3、復蘇第一管如有活性狀態問題及時與我們聯系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管。

特別說明：未與我方聯系擅自復蘇第二管出現問題不予售后。

細胞復蘇

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養基重懸，接種 T25 培養瓶，于 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。

4、第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。

細胞傳代

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 T25 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次。

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 完全培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。

細胞凍存

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 T25 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次。

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細胞加入 1ml/支的無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）

4、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。

T25細胞到貨處理

觀察

1、收到細胞后，請及時核對培養瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養瓶是否有破損或漏液等異常情況。

處理

1、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養瓶外部。

2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。

3、不要打開培養瓶蓋，將細胞放入 37 度培養箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態，并按常規貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。

貼壁

未超過 80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，留 5ml 完全培養基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養；超過 80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。首次傳代，建議 1:2 傳代兩個 T25，傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，進行對比培養。

細胞注意事項

個別細胞貼壁不牢，在運輸過程中發生細胞脫落，這是正常現象。

請將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對比培養使用），沉淀加入胰酶 1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加 5ml 完全培養基終止反應。再離心，棄上清，加 1-2ml 完全培養基重懸。然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，放入37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。

（注意：如收到密封培養瓶，處理完后放入培養箱培養時要將培養瓶蓋子擰松)

三、售后服務

細胞予重發

1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4.常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5.常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。

6.細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不重發

1.客戶操作造成細胞污染，不重發。

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。

四、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。