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本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中甲狀腺素和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭甲狀腺素抗體，加入酶標二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標二抗復合物。隨后結合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的甲狀腺素成負相關，通過標準曲線可準確定量樣品中甲狀腺素的含量。通過標準曲線計算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數即為實際樣品中甲狀腺素的含量。