大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞
基本信息
產(chǎn)品名稱 ： 大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ： 紀(jì)寧生物
組織來(lái)源 ： 腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介
大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在銀浸染標(biāo)本中，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。
少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyte)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(C N S)的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是，細(xì)胞發(fā)育是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，其形態(tài)、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒(méi)有嚴(yán)格的界限，因此，其分類是相對(duì)的。
這三型分別為：Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱前O 2A (pre-O 2A p ro genitorcell)。細(xì)胞呈圓形，表面光滑，直徑約3μm，體外混合培養(yǎng)時(shí)成簇生長(zhǎng)在星形膠質(zhì)表面，具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力，表達(dá)神經(jīng)節(jié)苷脂GM 1、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子(polysialic acid -neuralcellad h esionmolecule，P SA-NCAM )等。
Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起，極少數(shù)為單極突起，直徑約7μm ，有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時(shí)為雙潛能細(xì)胞，既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì)，故又稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞(oligo d en d ro cyte-typ e-2astro cyte p ro genitorcell，O 2A)。O 2A除表達(dá)G M 1和波形蛋白外還表達(dá)神經(jīng)節(jié)苷脂G D 3和G Q(淋巴雜交瘤株A 2B5產(chǎn)生G Q 的抗體)，故常用A 2B5抗體標(biāo)記O 2A 。
Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細(xì)胞。直徑約10μm 。根據(jù)其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細(xì)胞。不成熟的O L胞體常伸出4～5條較粗大突起，表面還殘留有A 2B5標(biāo)記物，同時(shí)也表達(dá)O 1-O 4抗原，無(wú)形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng)，大量表達(dá)半乳糖腦苷脂(galactocerebro side，G C )、蛋白脂蛋白(proteiolipidprotein，PLP)、髓鞘堿性蛋白(m yelin basic protein，M BP)等，有對(duì)軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞(簡(jiǎn)稱少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞)包括前O 2A 和O 2A 和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞，前兩者具有增殖能力。
方法簡(jiǎn)介
紀(jì)寧生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞采用胰蛋白酶消化、混合細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過(guò)專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
紀(jì)寧生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： PLL(0.1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 ： 含B-27、PD G F、bFG F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 雙極、多極形
傳代特性 ： 不傳代，不增殖，存活1-2周
傳代比例 ： 不傳代
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用紀(jì)寧生物配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈雙極、多極形，在紀(jì)寧生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞不傳代，不增殖，存活1-2周；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4)待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和紀(jì)寧生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們紀(jì)寧系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。
