英文名稱 ： Protein Disulfide Bond Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 100T/48S
儲存條件 ： 2-8℃
檢測方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6個月
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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提取液一
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液體 40mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液體40mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體120mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體20mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體7mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體1mL×1支
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1 支
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2-8℃保存
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產(chǎn)品說明：
巰基的存在使得蛋白質(zhì)能夠進(jìn)行二硫鍵的形成，從而維持分子的穩(wěn)定性和功能性。此外，巰基還參與到氧化 還原反應(yīng)中，具有重要的生物學(xué)作用。在細(xì)胞內(nèi)， 巰基含量的變化與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)，因此巰基 也成為了生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要研究對象。
本試劑盒測定的是蛋白質(zhì)中的游離巰基含量。一定條件下巰基會發(fā)生親核反應(yīng)，即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在 412nm處有最大吸收峰，據(jù)此可以計算蛋白質(zhì)游離巰基含量。
注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機(jī)、研缽/勻漿器、丙酮（AR）、蒸餾水。
注意事項：
1. 若樣本ΔA測定<0.01,可適當(dāng)增大樣本量后測定，注意同步修改空白管和標(biāo)準(zhǔn)管及計算公式；若樣本ΔA測定>1.5 ,可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測定，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。
2.可使用BCA法測定蛋白濃度。
實驗實例：
1、取 100μL馬血清，按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.113-0.047=0.066 ，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白=0.417-0.105=0.312，按樣本液體體積計算蛋白質(zhì)游離巰基含量得：
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/mL）=2.5×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)×F =0.529μmol/mL。
2 、取0.1036g鼠肝，按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.261-0.105=0.156，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白=0.417-0.105=0.312，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)游離巰基含量得：
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/g質(zhì)量)=0.25×ΔA測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =1.207μmol/g質(zhì)量。
3、取 0.1078g 黃豆粉，沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后，按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=0.123-0.070=0.053，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.417-0.105=0.312，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)游離巰基含量得：蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/g質(zhì)量)=0.25×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =0.788μmol/g質(zhì)量。
