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ELISA試劑盒操作步驟有哪些?

   ELISA試劑盒在國內有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是 ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等;ELISA試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測,自從60-70年代問世以來,得到*科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內生化領域的長足發展。

 

  
  Elisa生物試驗是一種敏感性高,異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。為了保證ELISA試劑盒實驗質量,我們需要掌握一些小技巧以助于實驗的成功,那么ELISA試劑盒的操作技巧您知道嗎?
  
  (一)樣品準備
  
  1.取動物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
  
  2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋(如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
  
  3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
  
  (二)檢驗方法
  
  1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
  
  2.取所需用量板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
  
  3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
  
  4.混勻,置37℃反應30分鐘。
  
  5.扣去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。
  
  6.每孔加記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。
  
  7.洗滌,同步驟5。
  
  8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。
  
  9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
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