原代細(xì)胞是從目標(biāo)組織或器官分離出來的異質(zhì)細(xì)胞群，包含了多種細(xì)胞類型，其中既有終末分化細(xì)胞，也包括干細(xì)胞、祖細(xì)胞以及其他一些仍具有分裂能力的細(xì)胞。相關(guān)閱讀：《什么是原代細(xì)胞？一文為您解讀》

（A）原代細(xì)胞直接來自被工程化的組織。（B）自從小鼠胚胎干細(xì)胞顯示出分化成各種器官類型的潛力以來，胚胎干細(xì)胞一直受到研究。（C）成體細(xì)胞可以從組織中提取，并通過遺傳轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)成干細(xì)胞狀態(tài)，從而重置細(xì)胞的表觀遺傳組織。（D）每種組織似乎都有駐留干細(xì)胞，有助于修復(fù)該組織。這些成體干細(xì)胞可以被分離并用于形成類似的組織。（圖片來源sciencedirect）

  原代細(xì)胞培養(yǎng)是指從組織中分離出細(xì)胞在體外進(jìn)行早期傳代培養(yǎng)（通常在5代以內(nèi)，更嚴(yán)格的會(huì)在3代以內(nèi)）。通過對原代細(xì)胞培養(yǎng)，科研者可以更好研究細(xì)胞生命過程、癌細(xì)胞病變、細(xì)胞工程等問題，因?yàn)樗峁└咏w內(nèi)環(huán)境細(xì)胞模型。

  細(xì)胞為什么要進(jìn)行傳代培養(yǎng)？

  當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中形成致密單層時(shí)，它們基本上已飽和。為了使細(xì)胞繼續(xù)生長并增加數(shù)量，必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。懸浮細(xì)胞可以直接分瓶，而貼壁細(xì)胞需要經(jīng)過消化后才能分瓶。

  貼壁細(xì)胞的消化法傳代

  材料和試劑

  細(xì)胞：貼壁細(xì)胞

  試劑：0.25%胰酶、1640培養(yǎng)基（含10%小牛血清）

  儀器和器材：倒置顯微鏡、培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等

  操作步驟：

  步驟1、吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

  步驟2、向瓶內(nèi)加入少許胰蛋白酶和EDTA混合液，以能覆滿瓶底為限。

  步驟3、將培養(yǎng)瓶置于溫箱中2~5分鐘，當(dāng)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，立即終止消化。

  步驟4、吸除消化液，向瓶內(nèi)注入數(shù)毫升Hanks液，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。

  注意：加Hanks液沖洗細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失。如用胰蛋白酶液單獨(dú)消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養(yǎng)液。

  步驟5、用吸管吸取營養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。注意：吹打細(xì)胞力度要適中，對一些脆弱細(xì)胞，建議使用細(xì)胞刮刀輕輕刮下細(xì)胞，避免吹打帶來損傷。

  步驟6、計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，把細(xì)胞懸液分成等份分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng)。

  實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

  1.預(yù)熱所有試劑: 將胰蛋白酶/EDTA、Hanks液或培養(yǎng)基預(yù)熱至37℃，可以提高消化效率，并減少對細(xì)胞的冷刺激。

  2.無菌操作: 所有操作都必須在無菌條件下進(jìn)行，以防止污染。

  3.優(yōu)化消化時(shí)間: 不同的細(xì)胞類型對胰蛋白酶/EDTA的敏感性不同，需要根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整消化時(shí)間。過短的消化時(shí)間會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞無法完全脫離瓶壁，而過長的消化時(shí)間則會(huì)損傷細(xì)胞。

  懸浮細(xì)胞的傳代

  試劑：培養(yǎng)基、平衡鹽溶液

  儀器和器材：離心管、吸管或移液器、新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿、計(jì)數(shù)板、凍存管

  操作步驟：

  直接法傳代

  步驟1、輕輕混勻細(xì)胞懸液：不要?jiǎng)×覔u晃，以免損傷細(xì)胞。可以使用血清移液管輕輕吹打幾次，使細(xì)胞懸浮均勻。

  步驟2、取少量細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)：使用計(jì)數(shù)板或自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)器對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，確定細(xì)胞密度和活力。

  步驟3、根據(jù)所需的細(xì)胞密度和傳代比例，計(jì)算分裝體積：例如，如果需要將細(xì)胞密度調(diào)整為1x10^5cells/mL，則需要根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果和分裝后的總體積計(jì)算需要轉(zhuǎn)移的細(xì)胞懸液的體積。

  步驟4、分裝細(xì)胞懸液：將計(jì)算好的體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮的培養(yǎng)基至所需的體積。

  步驟5、置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：將分裝好的細(xì)胞置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

  離心法傳代

  步驟1、將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，離心800-1000rpm，5分鐘。

  步驟2、去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液。

  步驟3、將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

  上述 是細(xì)胞傳代幾種步驟，科研者可以成功的進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)，為各種實(shí)驗(yàn)和研究提供穩(wěn)定可靠的細(xì)胞來源。