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ELISA 檢測中靈敏度和檢測范圍的區(qū)別

   在進行ELISA實驗測定中,有3個重要容易混淆概念:靈敏度、檢測限、量程下限,了解它們在不同領(lǐng)域中不同作用,對于實驗結(jié)果準確性和實際應(yīng)用有重要意義。

 

  區(qū)別

 

  在ELISA實驗中,靈敏度和檢測限(LOD)的概念與傳統(tǒng)臨床研究中定義的概念不同。

 

  在傳統(tǒng)臨床研究中,靈敏度通常是指儀器或方法在不同濃度下產(chǎn)生信號的能力。靈敏度是對濃度差異較小的分析物進行區(qū)分的能力的量度,表示單位濃度(或質(zhì)量)變化引起的測量信號的變化量。而檢測限則是能夠可靠地檢測到的分析物的最小量或濃度。檢測限(LOD)又稱檢測下限或最小可檢測量,定義為在一定的置信水平下能夠檢測到的分析物或成分的最小量或濃度。

 

  1975年,國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(IUPAC)建議檢測限和靈敏度如下:靈敏度Si定義為分析校準曲線的斜率。檢測限以濃度cL或定量qL表示,它源自給定分析程序可以合理確定地檢測到的最小測量值xL該試劑盒可以在LOD水平檢測蛋白質(zhì)的存在,但這種檢測是定性的而不是定量的。所以我們需要LOQ定量限。

 

  定量限(LOQ)定義為根據(jù)統(tǒng)計學(xué)原理可以定量測量的分析物的最小量或濃度。如果樣品中分析物的量超過此值,則樣品可以以一定的相對標準偏差定量。將濃度分為三個區(qū)域以了解LODLOQ之間的區(qū)別。如果實際濃度低于LOD,則視為未檢測到;如果實際濃度介于LODLOQ之間,則視為定性檢測;如果實際濃度高于LOQ,則視為定量測量。在此濃度下,信號足夠穩(wěn)定和一致,并且落在標準曲線的驗證范圍內(nèi),從而確保可重復(fù)性和精確度。根據(jù)信號檢測理論,我們可以將由背景噪聲引起的空白中測量的值用作基線,作為測量值的零點。美國化學(xué)學(xué)會環(huán)境改進委員會進一步細化了這些定義:LOD=Sb+3σ,LOQ=Sb+10σ,其中Sb是空白信號測量的平均值,σ是空白信號測量的標準偏差。

 

  然而,ELISA行業(yè)通常使用靈敏度一詞來描述檢測極限,兩者都指可以檢測到目標物質(zhì)的最低濃度或信號強度。我們提供的范圍下限可以理解為LOQ,但并不完全準確,因為在此極限以下仍可能存在線性范圍。在規(guī)定范圍的下限以下,仍可能存在線性檢測區(qū)域,但我們注明的范圍是根據(jù)實際樣品的實際濃度量身定制的。這種方法優(yōu)先考慮了研究人員的實用性和適用性,因為它反映了與實驗需求最相關(guān)的濃度。通過專注于可檢測且有意義的范圍,我們確保獲得的數(shù)據(jù)具有更大的實用價值,使研究人員能夠在研究中進行可靠的定量和定性分析。

 

  不同領(lǐng)域的意義

 

  疾病標志物診斷

 

  在疾病標志物診斷中,例如使用ELISA檢測前列腺癌的PSA,靈敏度決定了能否檢測到最早、最輕微的PSA存在。檢測范圍的下限必須足夠低,以覆蓋疾病早期可能出現(xiàn)的最低PSA水平,使醫(yī)生能夠啟動監(jiān)測并及時做出臨床決策。

 

  藥物開發(fā)

 

  在藥物研發(fā)中,靈敏度對于檢測藥物干預(yù)引起的靶蛋白濃度的哪怕是微量的變化都至關(guān)重要。檢測范圍的下限需要與給藥后蛋白質(zhì)的潛在低濃度保持一致,這對于準確評估藥物的影響至關(guān)重要。

 

  基礎(chǔ)研究

 

  在基礎(chǔ)研究中,例如研究細胞分化過程中的蛋白質(zhì)表達變化,靈敏度決定了是否可以檢測到分化開始時低表達的蛋白質(zhì)。檢測范圍的下限應(yīng)考慮初始低水平和隨后的變化,以便在整個分化過程中進行準確分析。

 

  對于學(xué)術(shù)研究人員來說,清楚了解ELISA的靈敏度和檢測范圍的下限至關(guān)重要。徹底理解這些概念可讓研究人員在疾病診斷、藥物開發(fā)和基礎(chǔ)研究等各個領(lǐng)域設(shè)計和進行更精確的實驗和分析。

 

  

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