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酶聯(lián)免疫吸附實驗的5大關(guān)鍵注意事項,別忽視第3條!

  千里之堤,潰于蟻穴。ELISA實驗操作雖簡便,但處處都是細(xì)節(jié)。從樣品準(zhǔn)備,到試劑回溫,從孵育到洗滌。紀(jì)寧生物帶大家一起來了解下注意事項


  1.樣品準(zhǔn)備

  常見的ELISA樣本有血清和血清、細(xì)胞培養(yǎng)上青、組織勻漿等等。避免使用嚴(yán)重溶血的血清樣品進(jìn)行實驗,樣品在實驗前需要充分混勻。

  2.試劑盒回溫

  確保桌面溫度在18-16℃。將試劑去除放置在桌面,避免回溫不充分。注意稀釋所用雙蒸水也須恢復(fù)至室溫。為避免試劑失效,請勿在恒溫箱等高溫環(huán)境下回溫。
紀(jì)寧ELISA試劑盒

  3.移液

  安裝吸頭。單通道移液器安裝吸頭時左右選擇擰緊,多通道移液器安裝吸頭時需前后按壓上緊。請勿上下振動,以免破壞移液器內(nèi)部結(jié)構(gòu)。吸取樣品時,將移液器按至底部二擋,洗液后按至一檔排出。注意吸頭應(yīng)位于反應(yīng)孔上方1/3處貼壁放液,請勿伸到反應(yīng)孔底部,避免破壞包被結(jié)構(gòu)。移液器切斜角度請勿超過45°注意在取樣品時,吸頭深入液面下1-2mm吸液,避免沾到多余液體。在液面下放液,吹打混勻,注意避免起氣泡。吸取洗滌液時,將移液器按至1檔洗液后,按至一檔,在反應(yīng)孔上方懸空放液避免產(chǎn)生氣泡。實驗過程中若剩余大量試劑,請回收至干凈的離心管,并做好標(biāo)記,為避免污染,請勿倒回原試劑瓶。


移液器

  4.孵育

  在說明書要求溫度下進(jìn)行孵育,實驗前請檢查儀器溫度,孵育過程中要注意受熱均勻,請勿疊放反應(yīng)板。

  5.洗滌

  去除孔內(nèi)液體時垂直甩板,請勿切斜甩板,以免造成交叉污染。為避免影響讀數(shù),請勿用手指接觸包被板底部。最后一次洗滌后,在吸水紙上完全拍干,直至無水漬殘留,也可以選用卷紙進(jìn)行拍干,避免使用碎屑較多的草紙

  
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