紀寧生物人食管纖維瘤細胞專用培養基傳代方法
培養條件
氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
換液頻率
每2-3天換液一次
消化液
0.25%胰蛋白酶
細胞貨期
7-8周左右
發貨方式
復蘇發貨（免運輸費用）/ 凍存發貨（需加干冰運輸費用）
供應范圍
僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
特別說明
具體操作步驟以隨貨產品說明書為主
二、細胞培養操作
收貨處理
取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態
傳代密度
細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養
傳代比例
首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿
傳代方法
1. 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化；
3. 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4. 待細胞完全貼壁后，培養觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的完全培養基。
三、注意事項
重要提醒
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。
到貨須知
1. 收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否完全揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。
2. 靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據)；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。
3. 由于運輸的原因，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
4. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。
四、售后服務
細胞予重發
1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。
2. 收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。
3. 收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。
4. 常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。
5. 常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。
6. 細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。
細胞不重發
1. 客戶操作造成細胞污染，不重發。
2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。
3. 非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。
4. 細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。
5. 細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。
6. 收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。
五、特別說明
上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。上海紀寧生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業單位提供的人食管纖維瘤細胞專用培養基科研試劑和完善的技術服務，滿足生物化學、分子生物學、細胞生物學、免疫學等生物科技實驗需求。
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