細胞計數是細胞培養比較關鍵步驟，通過細胞計數，用于確定細胞數量，判斷細胞數量是否滿足實驗需求。細胞計數有人工手動計數、自動細胞計數儀法等，目前實驗室較為常用的細胞計數法是在顯微鏡下使用血細胞計數板人工計數。

  細胞計數操作步驟

  一、準備好血細胞計數板

  首先，用無水乙醇清潔血細胞計數板表面和蓋玻片；

  其次，再用純水清潔血細胞計數板表面和蓋玻片；

  接著，清洗后用洗耳球吹干；

  最后，在血細胞計數板計數池上方蓋上專用的玻璃片。

  注意事項：在上述清洗過程，最好不要觸碰血細胞計數板計數池，避免標示線損壞。

  二、制備細胞懸浮液

  貼壁生長的細胞，使用胰酶消化使細胞從培養瓶表面脫落；

  旋渦混均或使用移液器反復吹細胞懸浮液，盡量減少細胞團簇；

  懸浮細胞則可以直接進行取樣計數；

  細胞懸液的計數濃度通常建議在 5×10?個細胞/mL到5×10?個細胞/mL 之間。

  注意事項：盡量減少細胞團簇；

  如需計算活率，則許按1:1的比例混合細胞懸液和0.4%臺盼藍染液，輕輕混勻，靜置1-2分鐘，使染料充分進入細胞。

  三、細胞加樣

  移液器輕吹細胞懸浮液使其混合均勻；

  將細胞懸浮液與臺盼藍染料按1:1體積混合均勻；

  取出10uL細胞懸液，將細胞懸液滴加于血細胞計數板邊緣凹槽處，此時液滴將在虹吸的作用下進入蓋玻片下方的計數池。

  注意事項：

  每次加樣前要混均細胞懸浮液，防止細胞沉降造成取樣誤差增大；

  在加樣過程，要一次性將細胞懸液注入計數室，防止氣泡產生，否則要重做；

  加樣時不要將細胞懸浮液直接吹入計數池，會造成細胞分布不均勻。

  四、人工細胞計數

  主要的計數工具：10X物鏡的顯微鏡、血細胞計數板。

  加樣后，將血細胞計數板靜置2-3分鐘；

  把血細胞計數板放置在顯微鏡的載物臺進行觀察，記錄和計數；

  分別計數大方格1，2,3,4中細胞總數。

  注意事項：

  計數時，建議重復1-2次，取平均值，減小計數誤差；

  4個區域細胞的數量偏差不少于5%，否則重新加樣。

  對橫跨刻度上的細胞，依照“數上不數下，數左不數右”的原則進行計數。

  為降低細胞計數誤差，濃度最好控制在5×105個細胞/ml以上（每個大方格有50個以上細胞）；

  計數時，只計數完整細胞，如有聚團細胞細胞則按一個細胞進行計數。

  上述是為大家介紹采用細胞計數板計數方法和步驟。希望你可以通過上述步驟對您細胞計數有了解，除此之外，細胞計數還有自動計數法，本篇不在累贅。下伙伴們可以業余時間去嘗試和對比，找到它們之間特點而提高細胞計數效率。