數(shù)百年來(lái)，醫(yī)生一直使用實(shí)驗(yàn)室檢查來(lái)確認(rèn)疾病診斷。在顯微鏡發(fā)明之前，實(shí)驗(yàn)室檢查都是通過(guò)肉眼宏觀觀察尿液和糞便等各種樣本進(jìn)行的。然而，僅靠宏觀檢查無(wú)法揭示微觀變化，例如寄生細(xì)胞、細(xì)菌和病毒的類型和形態(tài)。1590年，扎卡里亞斯·詹森和漢斯·詹森父子發(fā)明了光學(xué)顯微鏡，可以放大肉眼看不見(jiàn)的小物體。這項(xiàng)發(fā)明為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和其他科學(xué)領(lǐng)域的新發(fā)現(xiàn)和研究鋪平了道路。隨著時(shí)間的推移，檢測(cè)和測(cè)量樣本中目標(biāo)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室檢查方法不斷發(fā)展。這些進(jìn)步的例子包括RID（放射免疫擴(kuò)散）和RIA（放射免疫分析）技術(shù)。

  在顯微鏡實(shí)驗(yàn)室檢查技術(shù)的發(fā)展中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法成為一項(xiàng)重大突破。該技術(shù)由EvaEngvall和PeterPerlman于1971年發(fā)現(xiàn)。ELISA方法應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，已成為全球研究實(shí)驗(yàn)室和診斷中使用的常規(guī)技術(shù)。他們改進(jìn)了放射免疫分析(RIA)方法，用酶代替放射性碘125來(lái)結(jié)合抗原和抗體。

  ELISA法最早用于測(cè)定兔血清中的IgG抗體水平，并最終在美國(guó)和歐洲獲得專利，之后ELISA法開(kāi)始被研究者廣泛應(yīng)用。1974年，LJungstrom等人將此法應(yīng)用于寄生蟲(chóng)學(xué)，以鑒定旋毛蟲(chóng)病。1945年，Voller使用ELISA法診斷瘧疾。1978年至1981年，Bishai、Galli、Leinikki、Ukkonen等人使用ELISA法鑒定流感、副流感病毒和腮腺炎病毒引起的感染。1980年，Siegle等人用微量滴定板改良ELISA法，以鑒定各種激素、肽和蛋白質(zhì)的濃度。目前，ELISA方法廣泛用于COVID病毒抗原檢測(cè)、肝炎篩查、寄生蟲(chóng)分析、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、激素水平測(cè)量等研究和診斷目的。

  ELISA的工作原理有兩個(gè)：抗體和抗原之間的反應(yīng)，以及酶和底物之間的反應(yīng)。這些反應(yīng)發(fā)生在每個(gè)微孔板孔中。孔表面涂有針對(duì)目標(biāo)抗原的特異性抗體。當(dāng)將含有目標(biāo)抗原的樣品加入孔中時(shí)，抗體和抗原之間會(huì)發(fā)生反應(yīng)，形成抗體-抗原鍵。但是，樣品中可能含有其他不需要的抗原，這些抗原可通過(guò)用緩沖液清洗去除。然后，抗體-抗原復(fù)合物與酶標(biāo)記的抗體（酶標(biāo)記抗體）結(jié)合。為了確定抗體-抗原鍵的存在，需要添加底物，該底物與酶標(biāo)記抗體上的酶發(fā)生反應(yīng)，從而形成有色產(chǎn)物。為了停止該反應(yīng)，需要添加NaOH、HCl或硫酸。使用基于分光光度法原理的ELISA讀數(shù)儀測(cè)量所形成的顏色在400-600nm波長(zhǎng)處的吸光度。

  ELISA方法有三種類型：

  1、直接ELISA（抗原篩選）

  在直接ELISA中，抗原直接與酶標(biāo)記抗體結(jié)合。此方法通常用于測(cè)量抗原濃度。

  2、間接ELISA

  在間接ELISA中，抗原不直接與酶標(biāo)抗體結(jié)合，而是先與一抗結(jié)合。此方法通常用于測(cè)量樣本中的總抗體。

  3、夾心ELISA（抗體篩選）：與直接和間接ELISA不同，夾心ELISA涉及用捕獲抗體包被孔。這些抗體與目標(biāo)抗原結(jié)合，隨后被直接和間接抗體結(jié)合，形成類似夾心的結(jié)構(gòu)。這種方法通常用于測(cè)量復(fù)雜樣本中的抗原濃度，例如激素和細(xì)胞因子。

  該方法具有如下優(yōu)點(diǎn)：

  1、程序簡(jiǎn)單

  基于抗原和抗體之間的特異性反應(yīng)，具有高特異性和敏感性

  2、高效

  總體上是安全且環(huán)保的，因?yàn)樗恍枰派湫晕镔|(zhì)和大量的有機(jī)溶劑

  然而，ELISA也有缺點(diǎn)，例如：

  1、抗體制備成本高

  2、需要復(fù)雜的技術(shù)和昂貴的培養(yǎng)基

  3、出現(xiàn)高假陽(yáng)性/假陰性結(jié)果的可能性

  4、抗體不穩(wěn)定性

  5、由于抗體不穩(wěn)定，需要在低溫條件下運(yùn)輸和儲(chǔ)存

  總之，自1590年ZachariasJanssen和HansJanssen發(fā)現(xiàn)光學(xué)顯微鏡以來(lái)，實(shí)驗(yàn)室檢查經(jīng)歷了重大發(fā)展。1971年EvaEngvall和PeterPerlman開(kāi)發(fā)的ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）方法標(biāo)志著微觀實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的一個(gè)重要里程碑。該方法對(duì)疾病診斷、生物研究、醫(yī)學(xué)和其他科學(xué)領(lǐng)域做出了重大貢獻(xiàn)。在ELISA方法中，抗原、抗體和酶與底物之間的反應(yīng)發(fā)生在多孔微孔板內(nèi)，結(jié)果可以通過(guò)分光光度法測(cè)量。ELISA具有程序簡(jiǎn)單、靈敏度高、效率高等優(yōu)點(diǎn)。然而，也存在一些挑戰(zhàn)，例如抗體制備成本高以及可能出現(xiàn)假陽(yáng)性/陰性結(jié)果。盡管如此，ELISA仍然是當(dāng)今實(shí)驗(yàn)室檢查中最常用的方法之一，在疾病診斷、健康監(jiān)測(cè)和研究中有各種應(yīng)用。隨著科技的不斷進(jìn)步，期待未來(lái)ELISA方法能夠不斷發(fā)展，為提高醫(yī)療質(zhì)量和科學(xué)認(rèn)識(shí)做出更大的貢獻(xiàn)。