在復雜樣品基質中準確定量特定蛋白質，對許多科研工作者來說是一項極其寶貴的工具。這對于許多研究領域都至關重要，例如免疫篩查、各種診斷測試的開發(fā)、食品工業(yè)中潛在過敏原的檢測以及新型疫苗的生產(chǎn)。為了實現(xiàn)精準的蛋白質定量，科學家們開發(fā)了各種類型的免疫測定方法。這些方法利用高特異性抗體靶向特定蛋白質分子，從而準確檢測樣品中目標蛋白質的濃度。

  檢測復雜樣品基質中特定蛋白質的含量，對于許多科研工作者來說至關重要。這項技術在免疫篩查、診斷測試開發(fā)、食品過敏原檢測和疫苗生產(chǎn)等領域都有廣泛應用。現(xiàn)有的免疫測定方法種類繁多，可以利用高特異性抗體來識別并定量樣品中特定蛋白質的濃度。

  什么是酶聯(lián)免疫吸附法

  酶聯(lián)免疫吸附法也通常被稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。ELISA可用于通過形成酶觸發(fā)的顏色變化來檢測樣品中存在的各種抗體或抗原。大多數(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗被稱為固相測定。ELISA的4種主要類型是：

  1.直接ELISA：當樣品或抗原直接固定在微孔板上時，隨后結合的檢測抗體會與目標蛋白結合。然后使用底物產(chǎn)生信號。存在的分析物量與產(chǎn)生的信號量之間存在直接相關性。這種方法簡單快捷，但是，由于只使用一種抗體，它可能導致高背景水平，并且特異性可能較低。

  2.間接ELISA：該方法多出一個步驟來進行擴增檢測過程。首先將未結合的一抗與特異性抗原結合，然后將結合的二抗與一抗結合。底物可以產(chǎn)生與結合到微孔板上的抗原量成正比的信號。該方法的優(yōu)點是使用二抗進行擴增，但是，這可能會導致二抗引起交叉反應。該方法可用于檢測內源性抗體的量。

  3.夾心ELISA：這是最流行的ELISA類型。在該方法中，使用兩種特異性抗體（也稱為匹配抗體對）夾住抗原。產(chǎn)生的信號與樣品中存在的分析物的數(shù)量成正比。該方法具有最高的靈敏度和特異性，因為需要兩種抗體來結合目標蛋白，因此它也可以用于復雜的樣品基質。該方法可用于檢測生物樣品中存在的分析物的濃度。

  4.競爭性ELISA：這種方法主要用于較小的分子，因為不可能將兩種抗體夾在中間。這種方法類似于夾心ELISA，但使用結合抗原與抗原競爭結合位點。因此，抗原的量越大，結合抗原可結合的結合位點就越少。產(chǎn)生的信號與樣本中存在的蛋白質量成反比。這種方法非常適合檢測激素和較小的分子。

  什么是放射免疫分析

  放射免疫分析(RIA)是一種免疫分析程序，可使用放射性同位素檢測抗體和抗原復合物。這是一種體外檢測方法，可提供高靈敏度和高特異性（即使在微量濃度下）。RIA基于競爭性分析方法，使用碘的伽馬放射性同位素（稱為碘-125(125-I)）來標記抗原。125-I同位素可以制備成具有高比活度，并提供100%的同位素豐度。

  血清中的未標記抗原與放射性抗原競爭抗體結合位點。隨著未標記抗原數(shù)量的增加，更多的放射性標記抗原從抗體中被取代——這將導致抗體結合的放射性標記抗原與游離放射性標記抗原的比例降低。在該方案結束時，結合的抗原被分離出來，并使用伽馬計數(shù)器檢測上清液中的放射性標記游離抗原。

  ELISA和RIA之間的相似之處

  下面整理了ELISA和RIA的一些相似之處，如下：

  1.這兩種程序都是基于免疫測定技術。

  2.兩者都提供了高度敏感且具體的檢測方法。

  3.這兩種技術都依賴于抗體和抗原復合物的形成。

  4.兩者都可以用于測量給定樣本中存在的未知蛋白質的數(shù)量。

  5.兩者在診斷多種不同類型生物的各種疾病方面都發(fā)揮著關鍵作用。

  ELISA與RIA之間的區(qū)別

  下面列出了ELISA和RIA之間的一些差異：

  1.ELISA使用酶檢測抗體-抗原復合物，而RIA使用放射性同位素檢測抗體-抗原復合物。

  2.ELISA涉及標記抗體，而RIA涉及標記抗原。

  3.與RIA檢測相比，ELISA檢測的靈敏度較低。

  4.ELISA程序不需要特定的實驗室或訓練有素的工作人員，而RIA則需要特定的實驗室區(qū)域來處理放射性物質和訓練有素的工作人員。

  4.ELISA不需要特殊安排，而RIA則需要對放射性物質的征用、儲存和處置進行特殊安排。

  5.ELISA不涉及使用任何輻射危害，而對于RIA，任何輻射危害都需要記錄和報告。

  免疫測定法在任何涉及生物分析程序的實驗室中都發(fā)揮著關鍵作用。一些主要研究領域包括：生物制藥分析、生物安全、臨床診斷、食品檢測和環(huán)境監(jiān)測。特定蛋白質（抗原）的測量是診斷疾病過程中的基礎。上文提到ELISA或RIA之類的免疫測定方法可以提供簡單、快速且經(jīng)濟高效的分析程序。此外，特異性和靈敏度與大多數(shù)其他傳統(tǒng)方法相當，甚至更好。自動化潛力、高通量能力、同時分析多個樣本以及分析時間的顯著縮短使得免疫測定程序的使用在近年來更加流行。